Question

【題目】“地溝油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池。對地溝油的處理是一個難題，用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應用前景。為獲得高產脂肪酶的菌株，并將之用于產業化，某研究小組進行了一些實驗。請回答下列相關問題：

(1)欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細菌，應配制________碳源的培養基，這種培養基從功能上看屬于________培養基。

(2)經過稀釋，在平板上接入0.1 mL稀釋液并涂布，經適當時間培養后，在平板上計數菌落，據此可計算出每毫升培養液中的活菌數。這種計數方法得到的結果一般比實際值偏小，原因可能有________、__________________。

(3)經上述實驗得到如下表所示的結果，為保證結果準確，一般選擇________稀釋倍數的平板進行統計。有同學認為稀釋操作時，可以將1 mL培養液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數，這樣可以簡化步驟，省去梯度稀釋的麻煩。你認為這種方法是否合理并說明理由。____________

稀釋倍數	101	102	103	104	105	106
培養 結果
計數(平均值)	難以計數	難以計數	難以計數	159	17	2

(4)如果脂肪酶的產業化需要其活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩定的酶活性，則應選擇右表中的________法固定化工藝。使用分泌脂肪酶細菌與固定化脂肪酶進行生產，都需要適宜的________(填入下面選項的序號)。

①溫度　　②水　　③營養　　④pH

Answer 1

【答案】以脂肪為唯一(碳源)　 選擇 有的菌落是由2個以上的細菌形成的 涂布器上還殘留少量細菌 104　 不合理(否) ，在做梯度稀釋之前不能確定這個稀釋倍數的每個平板的菌落是否在30～300之間 包埋(法) ①②④

【解析】

本題考查微生物的實驗室培養、酶的活性實驗和固定化酶技術的有關知識，意在考查考生識圖能力和能從課外材料中獲取相關的生物學信息，并能運用這些信息，結合所學知識解決相關的生物學問題的能力；能運用所學知識與觀點，通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論；考查理論聯系實際，綜合運用所學知識解決自然界和社會生活中的一些生物學問題的能力。

(1) 欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細菌，要在培養基中加入特定的碳源，應配制以脂肪為唯一碳源的培養基，這種培養基從功能上看屬于選擇培養基。

(2)在平板上接入稀釋液并涂布，培養后，在平板上計數菌落，據此計算每毫升培養液中的活菌數。由于可能有的菌落是由2個以上的細菌形成的，也可能涂布器上還殘留少量細菌，故這種計數方法得到的結果一般比實際值偏小。

(3) 為保證結果準確，一般選擇104稀釋倍數，稀釋操作時，將1 mL培養液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數，因為在做梯度稀釋之前不能確定這個稀釋倍數的每個平板的菌落是否在30～300之間，故這種方法不合理。

（4）如果脂肪酶的產業化需要其活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩定的酶活性，則應選擇表中的包埋法固定化工藝，因包埋法酶活力損失小，與載體結合力強，成本適中，符合產業化的要求。使用分泌脂肪酶細菌與固定化脂肪酶進行生產，需要適宜的溫度、水、pH等，保證細菌正常生活，酶的最適溫度和酸堿度。