Question

【題目】回答與微生物的培養、分離及應用有關的問題：

(1)微生物相關實驗常常要求進行無菌操作，如在使用三角瓶時需依次用 ______________、牛皮紙封口后進行滅菌，制備尿素固體培養基過程中采用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法和 _____________________。

(2)采用如圖固定化裝置進行葡萄糖發酵制酒精，圖中 a 是 ____________，該實驗中其可以反復利用，實驗過程一定要在____________、無氧且溫度和 pH 適宜等條件下進行。在發酵過程中 葡萄糖濃度不能過高，否則 __。在使用較低濃度葡萄糖溶液過柱時，反應柱流 出液中仍有葡萄糖， 其原因可能 是_________(答出 2 點)。

(3)在果酒釀造過程中，如果果汁滅菌不嚴格，含有醋桿菌，酒精發酵旺盛時，醋桿菌不能將果汁中的糖發酵為酸的原因是 _______。為了測定酵母菌的活細胞密度，將待測菌液稀釋 1000 倍后， 經等體積的染色劑溶液染色( 活細胞無色，死細胞藍色)，用血細胞計數板計數( 規格 2mmx2mx0.1mm，有 25 個中方格)，理論上計算 5個中方格的活細胞數不應少于 __________________才能達到每毫升 3×109 個活細胞的預期密度。

(4)用比色計測定某種果醋中的葡萄糖含量，需要制作____的標準曲線。實驗中一般不能更換比色杯，若制作標準曲線時的比色杯光程小于測定樣液的比色杯光程，測得的樣液中葡萄糖含量 ______ (填“偏大”、“偏小”或“無影響”)。

Answer 1

【答案】封口膜(或 6 層紗布) G6 玻璃砂漏斗過濾 固定化酵母 無菌 酵母菌會因失水過多而死亡 反應柱中流速過快、固定化酵母細 胞數目較少 醋桿菌是好氧細菌，而果酒發酵為無氧環境，醋桿菌無法生存 120 葡萄糖濃度與光密度值關系 偏大

【解析】

分析題圖：圖示為固定化酵母的反應柱示意圖，圖中a為固定化酵母，當原料葡萄糖從漏斗口進活塞1進入反應柱，在固定化酵母的發酵，產物酒精經活塞2流出。圖中長的彎形導管有排氣（酵母產生的CO2）和防止外來雜菌污染的作用。

(1)在使用三角瓶時需依次用封口膜或 6 層紗布和牛皮紙封口后進行干熱滅菌；制備的尿素固體培養基可以采用高壓蒸汽滅菌法和G6 玻璃砂漏斗過濾。

(2)結合前面的分析可知，圖中a是固定化酵母，在該實驗中可以反復利用；根據酵母菌的無氧發酵要求可知，實驗過程一定要在無菌、無氧且溫度和pH適宜等條件下進行。為了防止酵母菌會因失水過多而死亡，在發酵過程中所用的葡萄糖濃度不能過高。如果所采用的葡萄糖濃度較低的情況下反應柱流出液中仍含有葡萄糖，其可能原因是反應柱中流速過快或者反應柱中固定化酵母細胞數目較少。

(3)果酒（酵母菌無氧呼吸才能產生酒精）是在無氧條件完成，而果醋發酵（醋酸菌是需氧菌）需要在氧氣充足的條件下進行，所以當酒精發酵旺盛時，醋桿菌不能將果汁中的糖發酵為酸。1毫升懸液中待測標本（菌體）總數＝80小方格內菌體數÷80×400÷(2×2×0.1)×103×稀釋倍數。而臺盼藍與菌液等體積加入，因此要達到每毫升3×109個活細胞的預期密度，理論上無色細胞數應該不少于(3×109) ÷(1.25×105×2×103)=120個。（注意：5個中方格含80個小格，而血球計數板共400個小格）。

(4)借用比色法測定亞硝酸鹽含量的方法可知，用比色計測定果醋中葡萄糖含量，需要先制作葡萄糖濃度與光密度值關系的標準曲線。實驗中一般不能更換比色杯，若制作標準曲線時的比色杯光程小于測定樣液的比色杯光程，測得的樣液中葡萄糖含量偏大。