Question

【題目】白細胞介素是人體重要的淋巴因子，具有免疫調節、抑制腫瘤等多種功能。近年來科學家將藥用蛋白轉向植物生產，如圖是將人的白細胞介素基因導入馬鈴薯中，培養生產白細胞介素的過程。（tsr為一種抗生素—硫鏈絲菌素的抗性基因）

（1）提取人的白細胞介素基因適宜選用的限制酶是___________，不能使用限制酶SmaI的原因是___________。

（2）除圖示方法外，也可從利用___________法構建的cDNA文庫中獲取目的基因。獲得目的基因后可采用PCR技術大量擴增，需提供Taq酶和___________等。

（3）將目的基因導入馬鈴薯細胞常采用___________法，其原理是將目的基因導入Ti質粒上的___________。

（4）為篩選出含目的基因的馬鈴薯細胞，需要在培養基中添加___________。最終為了檢測目的基因是否在馬鈴薯中表達，可通過____________方法進行分子水平的檢測。

Answer 1

【答案】PstⅠ和HindⅢ 限制酶SmaⅠ酶切位點位于白細胞介素基因中部，使用它會造成目的基因斷裂 反轉錄 引物 農桿菌轉化 T-DNA 硫鏈絲菌素 抗原—抗體雜交

【解析】

分析題圖，圖示表示人的白細胞介素基因表達載體的構建過程，載體和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位點，所以切割載體和目的基因時用限制酶PstⅠ和HindⅢ，再用DNA連接酶連接目的基因和運載體形成重組載體。獲取目的基因的方法包括從基因文庫中獲取、cDNA文庫法、供體細胞的DNA中直接分離基因（鳥槍法）。農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將Ti質粒的T-DNA插入到植物基因組中。

（1）載體和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位點，使用限制酶SmaI則會破壞目的基因；

（2）目的基因的獲取可以采用cDNA文庫法（即逆轉錄法），指以某生物成熟mRNA為模板逆轉錄而成的cDNA序列的重組DNA群體，采用PCR技術大量擴增，需提供Taq酶和引物等；

（3）將目的基因導入植物細胞常采用農桿菌轉化法，利用的是Ti質粒上的T-DNA；

（4）構建好的表達載體含有硫鏈絲菌素的抗性基因，因此可以在培養基中添加硫鏈絲菌素進行篩選，為檢測目的基因是否順利表達，可以通過抗原-抗體雜交技術。