Question

【題目】巴氏芽孢桿菌是一類具有較高脲酶活性，能夠分解尿素的細菌，廣泛分布在土壤、堆肥及污水中。這種細菌能夠將氮肥中的尿素分解成氨態氮被植物吸收，對土壤的肥力有著重要作用。研究人員擬從土壤樣品中分離該類細菌，下圖所示為操作流程，①~⑤表示操作步驟。請回答下列問題：

（1）配制培養基時，按照培養基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調節培養基的__________，及時對培養基進行分裝，并進行_______滅菌。

（2）步驟②富集培養所使用的培養基按用途來分應為_____培養基，步驟②的主要目的是_____。

（3）在步驟④的培養基中加入______試劑，根據培養基是否變紅來鑒定是否為尿素分解菌。若用該方法培養設置了3個培養皿，菌落數分別為163個、158個、159個，則可以推測富集培養后的菌液中每毫升含細菌數為______個，運用這種方法統計的結果往往較實際值_________。

（4）要進一步分離純化巴氏芽孢桿菌采用步驟⑤_______法進行操作，在該操作過程中接種工具至少要灼燒______次。

Answer 1

【答案】pH 高壓蒸汽（濕熱） 選擇 增加巴氏芽孢桿菌的濃度（數量） 酚紅 1.6×106 偏低 平板劃線 6

【解析】

據圖可知，富集培養后的培養液稀釋了1000倍，步驟④中涂布的稀釋液體積為0.1ml，步驟⑤為平板劃線。

（1）配置固體培養基的基本步驟是計算、稱量、溶化、調pH、分裝、滅菌，培養基滅菌一般采取高壓蒸汽滅菌。

（2）步驟②富集培養目的是增加培養液中巴氏芽孢桿菌的濃度，所使用的培養基應以尿素為唯一碳源，按用途來分應為選擇培養基。

（3）鑒定是否為尿素分解菌，可在步驟④的培養基中加入酚紅試劑，尿素分解產生的氨會使培養基呈紅色。用該方法培養設置了3個培養皿，菌落數分別為163個、158個、159個，則平均菌落數為（163+158+159）/3=160，則富集培養后的菌液中每毫升含細菌數為160÷0.1×1000=1.6×106個，由于個別菌落可能是由2個或多個細菌形成的，運用這種方法統計的結果往往較實際值偏小。

（4）步驟⑤為平板劃線，每一次劃線前后均需要灼燒接種工具，在該操作過程中接種工具至少要灼燒6次。