Question

【題目】土壤中含有大量的難溶性磷酸鹽，為了從土壤中篩選出能夠?qū)㈦y溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為植物能吸收的可溶性磷的優(yōu)良解磷菌株，以便將其添加到有機(jī)肥中，改善植物磷元素供應(yīng)。科研人員進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：

實(shí)驗(yàn)原理：固體培養(yǎng)基中難溶性磷酸鹽在微生物的作用下溶解，會(huì)在菌落周圍形成透明圈（如圖），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

實(shí)驗(yàn)步驟：

菌株	透明圈直徑 （D）	菌落直徑 （d）	D/d
M-3-01	18.8	12.3	1.5
B3-5-6	20.7	8.0	2.6
T1-4-01	9.1	6.5	1.4

步驟1 取某地區(qū)土樣5g制得土壤溶液后稀釋，取稀

釋液1mL接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上，在適宜溫度下培養(yǎng)72h。

步驟2 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上用接種環(huán)挑取代表性菌落再次接種，培養(yǎng)3～4d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優(yōu)良解磷菌株（如表）。

分析回答：

（1）從物理形態(tài)看，培養(yǎng)基A屬于_______培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中磷源應(yīng)該是______________。

（2）步驟1中接種方法是__________________，步驟2中接種環(huán)的滅菌方法是________。

（3）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以確定溶解磷能力最強(qiáng)的菌株是_____________。

（4）為進(jìn)一步測(cè)定初步篩選的三種菌株實(shí)際溶解磷的能力，研究人員將它們接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基B中，并在37℃、200 r·min-1 搖床培養(yǎng)，定期取上清液，測(cè)定溶液中可溶性磷含量，得到圖所示曲線。

①用搖床進(jìn)行培養(yǎng)的好處是__________________________

②結(jié)果表明最優(yōu)良的解磷菌株是_______________。

Answer 1

【答案】（1）固體 難溶性磷酸鹽

（2）稀釋涂布平板法 灼燒

（3）B3-5-6

（4）①增加培養(yǎng)液中的溶氧量；使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，有利于物質(zhì)的交換（2分）

②M-3-01

【解析】

（1）菌落必需在固體培養(yǎng)基上才能形成（培養(yǎng)過程中菌體不能運(yùn)動(dòng)）；要篩選溶解難溶性磷能力強(qiáng)的菌株，必須以難溶性磷酸鹽作為唯一磷源。

（2）步驟1的目的是從土壤微生物中篩選解磷微生物，由于土壤樣液中微生物種類和數(shù)量多，因此，最好采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種（如果用平板劃線法，則有可能不能將全部種類的微生物進(jìn)行接種，當(dāng)然本題步驟1中“取稀釋液1mL接種”也暗示接種方法是稀釋涂布平板法）。

（3）接種環(huán)滅菌方法是灼燒，涂布器的滅菌方法是先將涂布器浸入酒精中，再將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃

（4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中“透明圈直徑與菌落直徑比代表微生物溶解磷的能力大小”，結(jié)合表格數(shù)據(jù)可以確定解磷能力最強(qiáng)的菌株是B3-5-6。

（5）搖床培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)需氧微生物的常用方法，使用搖床培養(yǎng)，不僅可以增大培養(yǎng)液中溶氧量，促進(jìn)微生物的有機(jī)呼吸，而且能夠增加菌體與培養(yǎng)液的接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。

（6）根據(jù)實(shí)驗(yàn)曲線圖，不難看出M-3-01實(shí)際溶解磷能力最強(qiáng)。