Question

【題目】現代生物技術與技術應用

已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原。 疫苗的生產和抗體的制備流程如圖所示。 請回答下列問題

（1）圖中X的名稱是_____。

（2）A基因重組載體（ 重組質粒） 在受體細胞中表達出A蛋白，該過程除證明了質粒可以作為運載體外，還證明了_____。

A、質粒能自我復制 B．質粒有一個或多個酶切點

C．質粒有標記基因 D．生物間共用相同遺傳密碼子

（3）A基因在大腸桿菌細胞內表達時，表達出的蛋白質可能會被降解。 為防止蛋白質被降解，在實驗中對選用受體細胞大腸桿菌的要求是_____（ 填文字）。

（4）在提取分離A蛋白生產過程中，要保持A蛋白的活性，需注意的事項有（ 多選）_____。

A、適宜的溫度 B．添加逆轉錄酶

C．適宜的pH 　　 D．添加蛋白酶抑制劑

形成有效的重組質粒，選擇適當的限制性內切酶很重要。 如圖1示意大腸桿菌質粒的相關基因與限制酶切點；圖2示意有關限制酶在DNA分子中的具體切點。

（5）要成功轉入目的基因且重組效率較高，選擇限制酶的方案是_____，其原因是_____。

Answer 1

【答案】雜交瘤細胞 D 蛋白酶缺陷型 ACD 選用BamHⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶 兩種限制酶切，形成的黏性末端不同，質粒和目的基因不易重新自我結合

【解析】

由圖可知：①逆轉錄；②目的基因的獲取；③構建基因表達載體；④把目的基因導入受體細胞；⑤用A蛋白對小鼠進行免疫處理，使B細胞發生增殖分化；⑥B細胞增殖分化出漿細胞和記憶B細胞；⑦細胞融合。X雜交瘤細胞。

結合質粒和目的基因中的限制酶切點可知，不能選擇EcoRV進行切割，因為其會破壞目的基因；目的基因和載體共同含有的限制酶切點只有BamHⅠ和EcoRⅠ。

（1）由以上分析可知，圖中X是漿細胞和骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞。

（2）一種生物的基因能在另一種生物體內表達，說明生物間共用相同的遺傳密碼子。故選：D。

（3）A基因在大腸桿菌細胞內表達時，表達出的蛋白質可能會被降解。為防止蛋白質被降解，根據酶的專一性原理可知，在實驗中要求受體細胞是蛋白酶缺陷型大腸桿菌。

（4）影響酶活性的因素有溫度、pH和抑制劑等，因此在提取分離A蛋白生產過程中，要保持A蛋白的活性，需適宜的溫度、適宜的pH、添加蛋白酶抑制劑（防止A蛋白被分解）。故選：ACD。

（5）圖2中A基因兩側有限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ和HindⅠ的切割位點，為了防止構建基因表達載體時目的基因和質粒自身環化或反向連接，應該用兩種不同的限制酶切割，又由于圖1質粒上不含限制酶HindⅠ的切割位點，因此要成功轉入目的基因且重組效率較高，應該選擇限制酶BamHⅠ和EcoRⅠ。