Question

【題目】圖甲、乙中標注了相關限制酶的酶切位點。培育轉基因大腸桿菌的敘述錯誤的是（ ）

A.若通過PCR技術提取該目的基因，應該選用引物甲和引物丙

B.圖中質粒和目的基因構建表達載體，應選用BclⅠ和Hind Ⅲ剪切

C.若將基因表達載體導入受體細胞中，需選用感受態的大腸桿菌

D.在受體細胞中，氨芐青霉素抗性基因和目的基因可同時表達

Answer 1

【答案】D

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。
4、目的基因的檢測與鑒定：
（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA：分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質：抗原-抗體雜交技術。
（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、若通過PCR技術大量擴增該目的基因，應該選用引物甲和引物丙，A正確；

B、圖甲中BamHⅠ同時切壞兩種抗性基因，不能選用，故圖乙中目的基因左側只能選BclⅠ，而質粒上沒有目的基因右側Sau3A的切點，兩者都有Hind Ⅲ的切點，為了防止目的基因與質粒隨意連接，故質粒和目的基因構建表達載體，應選用BclⅠ和Hind Ⅲ剪切，B正確；

C、若將基因表達載體導入受體細胞大腸桿菌時，需用鈣離子等處理，使其處于感受態，C正確；

D、在受體細胞中，插入目的基因時氨芐青霉素抗性基因被破壞，不能和目的基因可同時表達，D錯誤。

故選D。