Question

【題目】柯斯質粒是一種人工建構含有λ噬菌體DNA的cos位點（指互補的黏性末端結合形成的雙鏈DNA區域）和質粒復制子（ori）的新型載體，它同時兼具兩者特性，長度一般為5﹣7kb．λ噬菌體的末端酶能識別并切割兩端由cos位點包圍著的噬菌體基因組長度（38﹣52kb）的DNA片段，凡具有cos位點的任何DNA分子只要在長度上相當于噬菌體的基因組，就可以被識別并包裝成類似噬菌體感染大腸桿菌．圖1為應用柯斯質粒進行某一真核基因克隆的方案圖，圖2為不同的限制酶及相應的切割位點．請據圖分析回答：
（1）柯斯質粒可以作為基因工程載體的理由是具備、和啟動子、終止子等．
（2）如圖1所示柯斯克隆方案，宜采用酶對真核基因進行酶切，采用酶對柯斯質粒進行酶切，經連接后圖中（填a或b）將會被重新包裝進入λ噬菌體；柯斯質粒作為載體可攜帶的真核基因長度范圍為 ．
（3）檢測是否成功實現轉化的實驗思路是：將新包裝的類似噬菌體去感染大腸桿菌，后者能夠在含的培養基上生長即為轉化成功．
（4）從圖中信息可知上述柯斯克隆方案存在的缺點是 ．

Answer 1

【答案】
（1）標記基因；多種限制酶切割位點
（2）Sau3A、Hind III；BamHI、Hind III；b；31﹣47kb
（3）氨芐青霉素
（4）經限制酶切割作用產生的柯斯質粒載體、真核基因自身也會連接形成多聚體分子
【解析】解：（1）由圖可知，柯斯質粒可以作為基因工程載體的理由是具備標記基因（氨芐青霉素抗性基因）、多種限制酶切割位點（具有限制酶EcoRI、PstI、BamHI、Hind III 的切割穩定）和啟動子、終止子等．（2）不宜用限制酶PstI切割，因為該酶切割會破壞標記基因（氨芐青霉素抗性基因）；不宜用限制酶EcoRI切割，因為該酶切割會破壞目的基因；由于限制酶BamHI的識別序列中含有限制酶Sau3A的識別序列，因此為了防止目的基因與運載體反向連接，宜采用 Sau3A、Hind III酶對真核基因進行酶切，采用BamHI、Hind III 酶對柯斯質粒進行酶切；由于a只有一端有cos位點，而b的兩端都有cos位點，因此經連接后圖中b將會被重新包裝進入λ噬菌體；柯斯質粒長度一般為5﹣7kb，λ噬菌體基因組長度為（38﹣52kb），凡具有cos位點的任何DNA分子只要在長度上相當于噬菌體的基因組，就可以被識別并包裝成類似噬菌體感染大腸桿菌，因此柯斯質粒作為載體可攜帶的真核基因長度范圍為（38﹣7）～（52﹣5），即31﹣47kb．（3）由圖可知，標記基因是氨芐青霉素抗性基因，因此檢測是否成功實現轉化的實驗思路是：將新包裝的類似噬菌體去感染大腸桿菌，后者能夠在含氨芐青霉素的培養基上生長即為轉化成功．（4）從圖中信息可知上述柯斯克隆方案存在的缺點是經限制酶切割作用產生的柯斯質粒載體、真核基因自身也會連接形成多聚體分子． 所以答案是：（1）標記基因 多種限制酶切割位點；（2）Sau3A、Hind III；BamHI、Hind III；b；31﹣47kb；（3）氨芐青霉素；（4）經限制酶切割作用產生的柯斯質粒載體、真核基因自身也會連接形成多聚體分子
【考點精析】解答此題的關鍵在于理解基因工程的原理及技術的相關知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．