Question

【題目】下圖是綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程示意圖，請據圖同答：

（1）(科學家獲取綠色熒光蛋白基因所選用的限制酶是________，最終獲得的綠色熒光蛋白基因的末端類型屬于___________。

（2）構建重組質粒的目的是__________________________。為此，在重組質粒中，除了綠色熒光蛋白基因和復制原點外，還應有___________。

（3）將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞，常用的方法是________。

（4）圖中的豬卵母細胞一般處在________期，常通過________（物理方法）對重組細胞進行激活，使其完成減數分裂和發育進程。

Answer 1

【答案】PstⅠ和EcoRⅠ 黏性末端使綠色熒光蛋白基因在受體細胞中穩定存在并遺傳給下一代，同時能夠表達和發揮作用啟動子、終止子和標記基因顯微注射法MⅡ中（減數第二次分裂中）電脈沖（或電刺激）

【解析】

分析題圖，圖示為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉基因克隆豬的培育過程示意圖，其中①表示從水母中獲取目的基因（綠色熒光蛋白基因）的過程；②表示基因表達載體的構建過程；③表示將目的基因導入受體細胞的過程；④表示提取體細胞核的過程；⑤表示去掉卵母細胞的細胞核的過程，⑥表示核移植過程；⑦表示早期胚胎培養過程；⑧表示胚胎移植過程。

（1）據圖分析，若使用SmaⅠ限制酶，會破壞目的基因，因此獲取綠色熒光蛋白基因所運用的限制酶應是圖中所示的PstⅠ和EcoRⅠ。根據獲得的綠色熒光蛋白基因的末端特點可知其屬于黏性末端。

（2）基因工程中，構建重組質粒的目的是使綠色熒光蛋白基因在受體細胞中穩定存在并遺傳給下一代，同時能夠表達和發揮作用；重組質粒的組成成分包括目的基因（綠色熒光蛋白基因）、標記基因、復制原點、啟動子和終止子。

（3）將目的基因導入豬胎兒成纖維細胞（動物細胞）常用顯微注射法。

（4）作為受體細胞的去核卵母細胞一般處在減數第二次分裂中期，常通過電脈沖刺激進行激活，使其完成減數分裂和發育進程。