Question

【題目】以下是基因工程四個(gè)主要操作步驟：①基因表達(dá)載體的構(gòu)建；②將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；③目的基因的獲取；④目的基因的檢測(cè)與鑒定。請(qǐng)分析回答相關(guān)問(wèn)題：

(1)基因工程操作的正確步驟是 ____（填數(shù)字）。

(2)進(jìn)行③操作時(shí)，可以從基因文庫(kù)中獲取，基因文庫(kù)分為基因組文庫(kù)和______兩種，其區(qū)別是______；PCR擴(kuò)增也是獲取目的基因常用的方法，進(jìn)行PCR時(shí)，需要向擴(kuò)增儀中加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種原料、_____以及引物，合成引物的前提是____。

(3)進(jìn)行操作①時(shí)，應(yīng)先選擇合適的載體，常見(jiàn)的載體是質(zhì)粒，質(zhì)粒的本質(zhì)是_______；右圖是常用的pBR322質(zhì)粒載體，該質(zhì)粒含有抗氨芐西林基因(Ampt)和抗四環(huán)素基因(Tetr)，兩個(gè)抗性基因中均具有限制酶酶切位點(diǎn)。若用限制酶Psl I切割并構(gòu)建好表達(dá)載體，后將構(gòu)建好的表達(dá)載體導(dǎo)入受體菌中，若受體菌_____，則說(shuō)明目的基因插入到了pBR322載體中。若受體菌____，則說(shuō)明目的基因沒(méi)有插入到pBR322載體中。

Answer 1

【答案】 ③①②④ 部分基因文庫(kù) 基因組文庫(kù)包含一種生物的全部基因而部分基因分庫(kù)只包含該種生物的部分基因 模板DNA 有一段已知的目的基因核苷酸序列 雙鏈環(huán)狀DNA分子 只有抗四環(huán)素性狀 既有抗氨芐西林性狀也有抗四環(huán)素性狀

【解析】試題基因工程的基本操作步驟：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定。

（1）根據(jù)前面的分析可知，基因工程步驟的操作順序是③①②④。

（2）基因文庫(kù)分為基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)兩種，其區(qū)別在于前者包含一種生物的全部基因，而后者只包含該種生物的部分基因；進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，需要四個(gè)基本條件是熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種原料、模板DNA以及引物，其中合成引物的前提是有一段已知的目的基因核苷酸序列。

（3）質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體，其實(shí)質(zhì)是小型環(huán)狀DNA，如題圖中pBR322質(zhì)粒。由于該質(zhì)粒中含有抗氨芐西林基因(Ampt)和抗四環(huán)素基因(Tetr)兩個(gè)標(biāo)記基因，其中Ampt中含有限制酶Psl I切割位點(diǎn)，如果用Psl I切割目的基因和該質(zhì)粒，讓它們連接形成重組質(zhì)粒，則該重組質(zhì)粒只含1種完整的Tetr的標(biāo)記基因，所以導(dǎo)入了該重組質(zhì)粒的受體菌只能抗四環(huán)素，不能抗氨芐西林。即是說(shuō)，受體菌中導(dǎo)入了該重組質(zhì)粒，則受體菌只出現(xiàn)抗四環(huán)素的性狀；若受體菌出現(xiàn)既抗四環(huán)素性狀，又抗氨芐西林性狀，則說(shuō)明導(dǎo)入的不是重組質(zhì)粒，而是不含目的基因的正常質(zhì)粒。