Question

8．(江蘇省黃橋中學2012屆高三月考)組建理想的載體需要對天然的質粒進行改造�？茖W家在體外構建的大腸桿菌的一種質粒只有某限制酶的一個識別序列，位于該質粒的lacZ基因中。lacZ基因若無外源基因插入，便可表達出半乳糖苷酶。當培養基中含有兩種物質I和X時，X便會被半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有該種質粒的大腸桿菌便不能表達半乳糖苷酶，培養基中的X不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落。體外構建的這種大腸桿菌質粒還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。下圖是利用lacZ基因的插入失活、篩選出重組質粒的示意圖。據圖回答下列問題：

        

(1)作為受體大腸桿菌應______________(填“含有”或“不含”)氨芐青霉素抗性基因，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理過的受體大腸桿菌，置于試管Ⅱ中，完成基因工程操作的______________________________步驟。

(2)圖中的選擇培養基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養物質外，還應加入__________________________________等物質，用以篩選導入了重組質粒的受體大腸桿菌。

(3)將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養基上培養，以檢測受體大腸桿菌是否導入重組質粒，請預測菌落的顏色，并分析結果：

①_______________________________________________。

②_______________________________________________。

(4)若改用噬菌體為運載體，科學家分別用³²P、³⁵S標記噬菌體內的目的基因、外殼，在下圖中標記元素³²P、³⁵S所在部位依次是________________(填圖中標號)。

Answer 1

答案：(1)不含　目的基因導入受體細胞

(2)I、X、氨芐青霉素

(3)①如果長出藍色菌落，說明沒有與目的基因重組的質粒已轉入受體菌(或說明重組質粒沒導入受體大腸桿菌)

②如果長出白色菌落，說明重組質粒已導入受體大腸桿菌

(4)①、④

解析：(1)標記基因是氨芐青霉素基因，受體細胞不應有該標記基因。該步驟是將目的基因導入受體細胞。(2)該選擇培養基中除營養物質外，還應該有氨芐青霉素起選擇作用和I、X起指示作用。(3)若導入了重組質粒，LacZ基因被破壞，不能表達，X不會水解成藍色；若未導入，X會水解形成藍色菌落。(4)³²P存在于脫氧核苷酸的磷酸基中，³⁵S存在于蛋白質的R基中。(5)效應T細胞與靶細胞密切接觸，使靶細胞裂解死亡。