Question

【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題：

限制酶	BamH	Bcl	Sau3A	HindⅢ
識別序列及切割位點	G↓GATCC CCTAG↑G	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	A↓AGCTT TTCGA↑A

（1）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用________和______兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過________酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于________態(tài)的大腸桿菌。

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中________。

（3）若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為_______，對于該部位，這兩種酶_______(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。

（4）若用Sau3AⅠ切圖1質粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。

Answer 1

【答案】BclⅠ HindⅢ DNA連接 感受 四環(huán)素 引物甲和引物丙 都不能 7

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：

（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA——分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質——抗原——抗體雜交技術。

（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ可能使質粒中的啟動子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割。酶切后的載體和目的基因片段，通過連接酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于感受態(tài)的大腸桿菌。

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，根據(jù)質粒上的抗性基因，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙。

（3）根據(jù)BamHⅠ和BclI的酶切位點，若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接，則連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，由于與兩種酶的酶切位點均不同，故這兩種酶都不能切開。

（4）根據(jù)BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位點，Sau3A I在質粒上有三個酶切位點，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。