Question

【題目】科研人員采用轉基因體細胞克隆技術獲得轉基因綿羊，以便通過乳腺生物反應器生產人 凝血因子IX醫用蛋白，其技術路線如圖。

(1)要想目的基因只在乳腺組織中表達，在構建基因表達載體A 時,需要將_________基因和__________等調控組件重組在一起。

(2)將A導入綿羊胎兒成纖維細胞中常用的方法是__________。將 A 導入受精卵能否獲得轉基因綿羊？ ______ ，判斷依據是________________.

(3)核移植的受體應選用__________期卵母細胞?。

(4)移植應選擇胚胎發育到________階段時進行;轉基因綿羊的性狀基本上與代孕母羊無關的原因是__________.

Answer 1

【答案】人凝血因子IX 乳腺組織特異性表達的啟動子 顯微注射法 能 因為受精卵具有發育全能性，將受精卵體外培養成早期胚胎再胚胎移植就可獲得轉基因綿羊 MⅡ中 桑椹胚或囊胚 胚胎的遺傳性狀基本不受受體任何影響

【解析】

DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體。

目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植。

(1) ①過程構建的A是含目的基因的（基因）表達載體。它必須將目的基因人凝血因子IX與乳（腺）蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起，才能通過分泌乳汁來生產人凝血因子IX醫用蛋白。

(2) 將A導入綿羊胎兒成纖維細胞中常用的方法是顯微注射法。因為受精卵具有發育全能性，將受精卵體外培養成早期胚胎再胚胎移植就可獲得轉基因綿羊。

(3) 在核移植之前，必須先去掉受體卵細胞的核，目的是保證核遺傳物質來自含目的基因的成纖維細胞，核移植的受體應選用處于MⅡ中期的卵母細胞。

(4) 移植應選擇胚胎發育到桑椹胚或囊胚階段時進行；代孕母羊對移入子宮的重組胚胎基本上不發生免疫排斥反應，這為重組胚胎在代孕母羊體內的存活提供了可能。轉基因綿羊的細胞核來源于供核母羊，因此轉基因綿羊的性狀與供核母羊最相似，基本上與代孕母羊無關。