Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種。

(1)研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用__________法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因。在上述引物設計時，分別在引物中加入下圖所示酶的識別序列，這樣可以用____________________酶處理兩個基因后，得到____________端(填圖中字母)相連的融合基因。

(2)將上述融合基因插入右圖所示Ti質粒的T－DNA中，構建________________并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含______________的固體平板上培養得到單菌落，再利用__________培養基震蕩培養，可以得到用于轉化的浸染液。

(3)剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是______________________________，進一步篩選后培養獲得轉基因油菜。

(4)提取上述轉基因油菜的mRNA，在____________酶的作用下獲得cDNA，再依據________的DNA片段設計引物進行擴增，對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完________。

Answer 1

【答案】 PCR ClaⅠ(限制酶)和DNA連接 A、D 表達載體(或“重組質粒”) 四環素 液體 利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞 逆轉錄 融合基因 轉錄

【解析】試題分析：本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關知識，關鍵能夠掌握目的基因獲取的方法，能夠結合圖解中限制酶切點選擇合成的工具酶獲得融合基因，同時掌握目的基因導入受體細胞以及目的基因檢測與鑒定的方法等，再結合題意，就能準確解答該題。

（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因。在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體即重組質粒并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震蕩培養，可以得到用于轉化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞。

（4）提取上述轉基因油菜的mRNA，在逆轉錄酶的作用下獲得cDNA，再依據融合基因的DNA片段設計引物進行擴增，對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完成轉錄。