Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從人血漿中制備。圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑，其中報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。

據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1） 在利用PCR技術(shù)獲取目的基因的過(guò)程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用____________尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增，PCR的原料是____________________。

（2）已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，構(gòu)建表達(dá)載體的過(guò)程中用該酶處理Ti質(zhì)粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是_____________________________________，在上述條件下DNA連接酶可以使HSA基因和Ti質(zhì)粒之間形成_____個(gè)磷酸二酯鍵。

（3） 過(guò)程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在讓______________進(jìn)入植物細(xì)胞；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含_____________的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。

（4） ③過(guò)程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，采用最多，也是最為有效的方法是______________，還可以使用__________________作為載體，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。

（5） 為檢測(cè)HSA 基因的表達(dá)情況，可提取受體細(xì)胞的 __________________，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】引物 dNTP 防止Ti質(zhì)粒發(fā)生自接 2 T-DNA 無(wú)色物質(zhì)K 顯微注射技術(shù) 動(dòng)物病毒 蛋白質(zhì)

【解析】

分析題圖可知，①表示將目的基因?qū)�入植物受體細(xì)胞，常用方法有：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；②表示將受體細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因植物，需要用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)；③⑤表示轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育過(guò)程，常以受精卵作為受體細(xì)胞，常采用顯微注射法。

（1）在利用PCR技術(shù)獲取目的基因的過(guò)程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增，PCR的原料是脫氧核糖核苷三磷酸（即dNTP）。

（2）防止Ti質(zhì)粒發(fā)生自接，構(gòu)建表達(dá)載體的過(guò)程中，用堿性磷酸酶處理Ti質(zhì)粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理；由于在上述條件下，堿性磷酸酶除去了質(zhì)粒核苷酸末端的5’磷酸，所以DNA連接酶可以使HSA基因和Ti質(zhì)粒之間只能形成2個(gè)磷酸二酯鍵。

（3）過(guò)程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，讓T-DNA進(jìn)入植物細(xì)胞；由于報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物，能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色，所以除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含無(wú)色物質(zhì)K的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。

（4）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞，采用最多、也是最為有效的方法是顯微注射技術(shù)，還可以使用動(dòng)物病毒作為載體，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。

（5）為檢測(cè)HSA 基因是否成功表達(dá)，可提取受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。