Question

【題目】科學家發現家蠅體內存在一種抗腫瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重視。臨床使用發現此蛋白質對腫瘤確實有良好的療效，可以通過基因工程技術導入大腸桿菌內進行大量生產。其過程大體如圖所示：

（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有___________________（至少寫出兩種）。

（2）圖中a過程叫_______________，它是基因操作的核心步驟，該過程中切質粒和目的基因的限制酶可以不同，但是產生的粘性末端要滿足____________條件。

（3）將抗腫瘤基因導入大腸桿菌，并在大腸桿菌細胞內成功表達產生了抗腫瘤蛋白，由于大腸桿菌具有__________________特點，因此在短時間內就能獲得大量的抗腫瘤蛋白。

（4）細胞工程可以作為輔助手段，通過獲得特定的單克隆抗體并與抗腫瘤蛋白結合制成“生物導彈”，以實現“靶向殺癌”。下面是單克隆抗體制備過程示意圖，請據圖回答：

① 圖中A過程從小鼠的脾臟中取得的“小鼠細胞”是___________細胞，要獲得能產生抗腫瘤蛋白抗體的雜交瘤細胞至少要經過__________次篩選。從小鼠體內提取分離該細胞之前，給小鼠注射的特定的物質是____________________。

② 為檢測雜交瘤細胞是否成功的合成了單克隆抗體，可以采用____________的方法。

Answer 1

【答案】 鳥槍法、人工合成法 pCR 構建基因表達載體 嚴格互補、繁殖快、代謝速度快 B 二 特異性的抗原 抗原抗體雜交

【解析】試題分析：基因工程技術的基本步驟：目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養，即用培養基培養和注入小鼠腹腔中培養；最后從培養液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取目的基因（鳥槍法）、PCR擴增目的基因、人工合成目的基因。

（2）圖中a表示構建基因表達載體，是基因工程的核心步驟。該過程中切質粒和目的基因的限制酶可以不同，但是產生的粘性末端要滿足嚴格互補的條件。

（3）選用大腸桿菌作為受體細胞，由于其繁殖速度快、產量較高，因此可以在短時間內獲得要表達的蛋白質。

（4）①單克隆抗體的制備過程中，采用的是已免疫的小鼠B細胞（漿細胞或效應B細胞），即經過注射特異性抗原，然后和骨髓瘤細胞的融合，需要經過至少兩次篩選（第一次篩選獲得雜交瘤細胞，第二次篩選獲得能產生抗體的雜交瘤細胞），最終篩選出來的雜交瘤細胞。

②為檢測雜交瘤細胞是否成功的合成了單克隆抗體，可以采用抗原抗體雜交的方法。