Question

(10分)肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術的基本流程如下圖甲所示。

請回答：

(1)進行過程①時，需用　　　　酶切開載體以插入let-7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為　      。

(2)進行過程②時，需用　　　　酶處理貼附在培養皿壁上的細胞，以利于傳代培養。

(3)研究發現，let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖乙所示。據圖分析，可從細胞中提取　　　　　　　進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是細胞中　　　　　　(選填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量減少引起的。

 

Answer 1

【答案】

 (1)限制性核酸內切(或限制)　啟動子　　(2)胰蛋白   (3)RNA　RAS蛋白

【解析】

試題分析：(1)過程①表示基因工程操作步驟中基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制性核酸內切酶(簡稱限制酶)對載體進行切割，以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結合的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程。

(2)過程②表示動物細胞培養，培養過程中出現接觸抑制現象后，可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細胞，隨后分裝到新的培養瓶中進行傳代培養。

(3)判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來檢測，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交。根據題中信息“肺細胞中的let－7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌”知，導入let－7基因后，肺癌細胞的增殖受到抑制；據圖2可知，let－7基因影響RAS基因表達的機理是：let－7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制。

考點：本題主要考查學生基因工程、細胞工程的相關知識，意在使學生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系，形成知識的網絡結構。