Question

【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖 1、圖 2 中標注了相關限制酶的酶切位點。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序列及切割位點

【1】若圖 2 中目的基因 D 是人的 α-抗胰蛋白酶的基因，現在要培養乳汁中含 α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需將該基因與質粒重組后，通過______方法）注入到羊的_____中。

【2】Sau3AI 酶切割 DNA 得到的粘性末端是_________。Sau3AI 酶能不能切開 BamH I 酶與 Bcl I 酶的識別序列？_____。

【3】用圖 1 中質粒和圖 2 目的基因構建重組質粒，應選用_____、_____兩種限制酶切割。

【4】被限制酶切割后的運載體和目的基因片段，通過_____酶作用后獲得重組質粒。

【5】若 BamH I 酶切的 DNA 末端與 Bcl I 酶切的 DNA 末端連接，連接部位的 6 個堿基對序列為_____。

【6】若按照 65 題中的兩種限制酶切割，并將重組質粒導入大腸桿菌，則導入成功的大腸桿菌

A.對四環素敏感對氨芐青霉素不敏感B.對四環素不敏感對氨芐青霉素敏感

C.對四環素和氨芐青霉素都敏感D.對四環素和氨芐青霉素都不敏感

Answer 1

【答案】

【1】 顯微注射 受精卵

【2】 能

【3】 Bcl I HindⅢ

【4】DNA連接酶

【5】

【6】B

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

【1】

基因與質粒重組后，通過顯微注射的方法注入到羊的受精卵中。

【2】

根據表格中限制酶的識別序列及切割位點，可知Sau3AI 酶切割 DNA 得到的粘性末端是；由于BamH I 酶與 Bcl I 酶的識別序列中都包括Sau3AI的識別序列，所以能切開二者的識別序列。

【3】

由于BamH I和Sau3AI會破壞質粒中的兩個抗性基因，不利于后期的篩選，所以應選用限制酶Bcl I和HindⅢ。

【4】

被限制酶切割后的運載體和目的基因片段，通過DNA連接酶連接二者之間的磷酸二酯鍵，從而獲得重組質粒。

【5】

根據BamHⅠ和BclI的酶切位點，若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接，則連接部位的6個堿基對序列為。

【6】

用限制酶Bcl I和HindⅢ切割，會破壞氨芐青霉素抗性基因，但不會破壞四環素抗性基因，則導入成功的大腸桿菌對四環素不敏感對氨芐青霉素敏感。

解題本題的關鍵，首先是理解好幾種酶的識別序列和切割位點，然后通過質粒和目的基因所位于的片段上，幾種酶的切割位點來解決問題。