Question

【題目】內皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽,具有強烈的血管收縮和促進平滑肌細胞增殖等作用,其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯系.ET主要通過與靶細胞膜上的ET受體結合而發揮生物學效應.ETA是ET的主要受體,科研人員試圖通過構建表達載體,實現ETA基因在細胞中高效表達,為后期ETA的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評價等奠定基礎.其過程如圖所示,圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的識別序列為,限制酶XhoⅠ的識別序列為.請分析回答:

（1）完成過程①需要加入緩沖液、原料、引物、dNTP和_____酶等

（2）過程③和⑤中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使______鍵斷開,形成__________。

（3）構建的重組表達載體,目的基因上游的啟動子是__________的部位，進而可驅動基因的轉錄。其中氨芐青霉素抗性基因的作用是___________。除圖中所標出的結構外，基因表達載體還應具有的結構是____________。

（4）過程⑥要用_____預先處理大腸桿菌,使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態細胞.

（5）將SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因,其目的是有利于檢測______________________。

Answer 1

【答案】 反轉錄（逆轉錄） 磷酸二酯 黏性末端 RNA聚合酶識別和結合 篩選含有目的基因（ETA基因）的受體細胞 終止子 CaCl2 ETA基因能否表達及表達量

【解析】試題分析：①②③表示通過逆轉錄法獲得目的基因，④表示構建基因表達載體，⑤表示限制酶切割質粒，⑥表示將重組質粒導入受體細胞，⑦表示目的基因的檢測。構建基因表達載體時，目的基因上游的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因的轉錄。將目的基因導入大腸桿菌時，需用Ca2+處理使其處于感受態，容易吸收外界DNA。SNAP基因是一種熒光蛋白基因，與ETA基因結合構成融合基因，可用于檢測ETA基因能否表達及表達量。

（1）過程①是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化。（2）限制酶切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成黏性末端。（3）目的基因上游的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，從而驅動基因的轉錄。其中氨芐青霉素抗性基因是標記基因，用于篩選含有目的基因（ETA基因）的受體細胞。基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因，所以除圖中所標出的結構外，還應有終止子。（4）過程⑥將目的基因導入大腸桿菌，要用CaCl2處理，使之處于感受態，容易吸收外界DNA。（5）SNAP基因是一種熒光蛋白基因，與ETA基因結合構成融合基因，可用于檢測ETA基因能否表達及表達量。