Question

【題目】2019年7月21日，國內首只商業化克隆貓經代孕貓自然分娩順利出生。克隆貓大蒜培育的大體過程如圖所示，回答下列問題：

（1）受體細胞通常需要培養至____________________________（時期）

（2）圖中細胞核供體在培養過程中要用胰蛋白酶處理，這說明細胞間的物質成分為______________，能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？并說明其原因：________________。

（3）重組細胞在早期胚胎培養液中培養至囊胚期，此時若想獲得胚胎干細胞（ES）可以取______________進行培養欲使ES細胞維持不分化狀態，需在培養液中添加______________。

（4）若想利用早期胚胎獲得更多同種克隆貓可利用________技術，所選代孕貓應滿足的條件是_________。

Answer 1

【答案】MⅡ（減數第二次分裂）中期 蛋白質 不能，動物細胞培養的最適pH為7．2~7．4，胃蛋白酶的適宜pH為2，胃蛋白酶在pH為7．2~7．4的動物細胞培養液中無活性 （囊胚）內細胞團 抑制因子 胚胎分割 同種、健康、生理狀態相同的其他雌貓

【解析】

1.動物細胞培養時，取幼齡動物的組織，剪碎后，用胰蛋白酶處理分散成單個細胞，制成細胞懸浮液，轉入細胞培養液中進行的培養是原代培養；當細胞貼滿瓶壁，在用胰蛋白酶處理分散成單個細胞，制成細胞懸浮液，轉入培養液中進行的是傳代培養。

2.胚胎移植是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態相同的其他雌性動物的體內，使之繼續發育為新個體的技術。

3.在體細胞克隆動物的過程中，取動物的體細胞培養，取10代以內的供體細胞的核，從屠宰的母畜體內獲取卵母細胞作為受體細胞培養至減數第二次分裂的中期，顯微操作去掉卵母細胞的核，然后去核的 卵母細胞與供體細胞的核進行核移植，形成重組細胞，體外培養重組細胞發育形成早起胚胎，然后進行胚胎移植，移植到同種、生理狀態相同的雌性動物的體內繼續發育，發育成熟后產下的動物即克隆動物，該技術利用了動物細胞核的全能性。

（1）根據以上分析可知，受體細胞卵母細胞培養至減數第二次分裂的中期。

（2）動物細胞培養過程中需要用胰蛋白酶處理，水解細胞間的物質，根據酶的專一性特點可知細胞間的物質為蛋白質，不能用胃蛋白酶替代胰蛋白酶處理，因為動物細胞培養的最適pH為7.2~7.4，胃蛋白酶的適宜pH為2左右，胃蛋白酶在pH為7.2~7.4的動物細胞培養液中失活。

（3）胚胎干細胞的來源有：可以取自囊胚時期的內細胞團的細胞或者取自胎兒的原始性腺，因此若想獲得胚胎干細胞（ES）可以取囊胚時期的內細胞團的細胞進行培養，欲使ES細胞維持不分化狀態，需在培養液中添加抑制因子。

（4）若想利用早期胚胎獲得更多同種克隆貓可利用胚胎分割技術，胚胎移植中所選代孕貓應滿足的條件是同種、健康、生理狀態相同的其他雌貓。