Question

【題目】為增加菊花的花色類型，研究者從其他植物的cDNA文庫中提取出花色基因C(圖1),擬將其與質粒（圖2)重組，再借助農桿菌導入菊花細胞中。圖3從上到下依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制酶的識別序列與切割位點。請分析回答：

（1）利用PCR技術擴增目的基因C的原理是_____________。

（2）圖2所示質粒被___________切割獲得的產物可與圖1所示基因C連接，理由是___________。

（3）經BamHⅠ處理后構建的重組質粒導入菊花細胞后，基因C不能表達，原因是質粒酶切部位的兩端無，導致基因C不能_____________。

（4）在添加四環素的固體培養基上，___________(填“能”或“不能”）篩選出含有插入基因C的重組質粒的農桿菌單菌落，原因是_________________________。

Answer 1

【答案】 DNA雙鏈復制 BamHI和Sau3AI 兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端 啟動子和終止子 轉錄 不能 含質粒的農桿菌和含重組質粒的農桿菌均含有抗四環素基因，在含四環素的培養基上均能生長

【解析】試題分析：試題分析：本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求學生識記基因工程的操作步驟及各步驟中需要注意的細節，能正確分析題圖，從圖中提取信息準確答題，屬于考綱理解和應用層次的考查。基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）利用PCR技術擴增目的基因C的原理是DNA雙鏈復制。

（2）據圖3可知，由于BamHⅠ和Sau3AⅠ兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端，因此圖2所示質粒被BamHⅠ和Sau3AⅠ切割獲得的產物可與圖1所示基因C連接。

（3）據圖可知，經BamHⅠ處理后構建的重組質粒導入菊花細胞后，基因C不能表達，原因是質粒酶切部位的兩端無啟動子和終止子，導致基因C不能轉錄。

（4）由于含質粒的農桿菌和含重組質粒的農桿菌均含有抗四環素基因，在含四環素的培養基上均能生長，所以在添加四環素的固體培養基上，不能篩選出含有插入基因C的重組質粒的農桿菌單菌落。