Question

【題目】將鼠的精子在保存液內與含有A基因的重組質粒保溫30 min，然后用于人工授精，共培育出127只小鼠。待小鼠生長至適宜大小時，對其中的36只進行PCR和DNA分子雜交檢測。結果表明，有6只攜有A基因的轉基因鼠，且體型大約為普通鼠的2倍。請回答下列有關問題：

（1） A基因（目的基因）表達效果與________基因相同。

（2）利用PCR技術可以擴增目的基因，PCR 技術的原理是___，該反應體系的主要成分應該包含擴增緩沖液、____、___、Taq 酶、引物等；引物應選用下圖中的_____（填圖中標號）。

（3）檢測A基因是否轉錄出mRNA時，需要用_________做探針，再與相應的物質雜交。

（4）在胚胎移植前對胚胎進行了檢查和篩選，發現有些胚胎因為外源基因的插入而死亡，外源基因插入導致胚胎死亡的原因可能是_______________。

Answer 1

【答案】生長激素 DNA雙鏈復制 模板DNA dNTP（四種脫氧核苷酸或脫氧核糖核苷三磷酸） A、D 放射性同位素標記的含目的基因的DNA片段 外源基因的插入導致胚胎正常發育所需的基因不能表達

【解析】

1、PCR技術反應的條件：①穩定的緩沖溶液環境；②DNA模板；③合成引物；④四種脫氧核苷酸；⑤耐熱的DNA聚合酶；⑥溫控設備。

2、基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）題干信息中“轉入A基因的老鼠的體型大約為普通老鼠的2倍”，說明A基因（目的基因）表達效果與生長激素基因相同。

（2）PCR是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術，其原理是DNA雙鏈復制。PCR反應體系包含緩沖液、Taq酶、原料（四種脫氧核苷酸或脫氧核糖核苷三磷酸）、引物以及模板（模板DNA）；引物應選用圖中的A和D。

（3）檢測目的基因是否轉錄出mRNA時，需要用標記的目的基因片段（放射性同位素標記）做探針，再與相應的物質雜交。

（4）胚胎移植前對胚胎進行了檢查和篩選，發現有些胚胎因為外源基因的插入而死亡，可能原因是外源基因的插入導致胚胎發育所需的正�；�因不能表達。