Question

【題目】如圖為某種質(zhì)粒，小箭頭所指為限制性?xún)?nèi)切酶EcoRⅠ的酶切位點(diǎn)，ampR為氨芐青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端包括EcoRⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)根據(jù)圖

回答下列問(wèn)題。

（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有_________、_________、_________三種。將此三種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的細(xì)菌A接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的細(xì)菌A所含有的連接產(chǎn)物是_________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌A所含有的連接產(chǎn)物是_________。

（2）假設(shè)人的生長(zhǎng)激素基因，與上述質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體后導(dǎo)入細(xì)菌B（本身不含有氨芐青霉素和四環(huán)素抗性質(zhì)粒），然后接種在一個(gè)只含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，得到如圖a所示的結(jié)果（圓點(diǎn)表示菌落），該結(jié)果說(shuō)明能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌中已經(jīng)導(dǎo)入了_________，反之則沒(méi)有導(dǎo)入；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到只含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b所示結(jié)果（空心圓圈表示與圖a中培養(yǎng)基上對(duì)照沒(méi)有菌落的位置）。與圖b圓圈相對(duì)應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是_________，這些菌落則是導(dǎo)入了_________的工程菌。

Answer 1

【答案】 目的基因和質(zhì)粒連接物 質(zhì)粒和質(zhì)粒連接物 目的基因和目的基因連接物 質(zhì)粒和質(zhì)粒連接物 目的基因和質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒和質(zhì)粒連接物 重組質(zhì)粒或普通質(zhì)粒 抗氨芐青霉素而不抗四環(huán)素 重組質(zhì)粒

【解析】試題分析：根據(jù)題干信息和圖像分析可知，圖中質(zhì)粒上含有限制性?xún)?nèi)切酶EcoRI酶切位點(diǎn)、氨芐青霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)，其中兩個(gè)抗性基因一般用于篩選重組質(zhì)粒，并且當(dāng)限制酶切割質(zhì)粒時(shí)，四環(huán)素抗性基因被破壞，即失活，因此在篩選時(shí)應(yīng)選擇含有氨芐青霉素抗性基因而四環(huán)素抗性基因被破壞的重組質(zhì)粒。

（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質(zhì)粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現(xiàn)3種連接結(jié)果，即目的基因自身連接形成的連接物，質(zhì)粒自身連接形成的連接物和重組質(zhì)粒（目的基因和質(zhì)粒連接物）。將此三種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的細(xì)菌A接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，由于構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，四環(huán)素抗性基因被破壞，因此能生長(zhǎng)的細(xì)菌A所含有的連接產(chǎn)物是質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接物；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，由于青霉素抗性基因沒(méi)有被破壞，因此能生長(zhǎng)的細(xì)菌A所含有的連接產(chǎn)物是目的基因與質(zhì)粒的連接物、質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接物。

（2）由于質(zhì)粒上有2個(gè)標(biāo)記基因，但抗四環(huán)素基因被插入的基因破壞掉，因此剩下的是抗氨芐青霉素抗性基因，如果在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，說(shuō)明已經(jīng)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒或普通質(zhì)粒，因?yàn)槠胀ㄙ|(zhì)粒和重組質(zhì)粒都含有抗氨芐青霉素的基因。與圖b空圈相對(duì)應(yīng)的圖a中的菌落表現(xiàn)型是抗氨芐青霉素但不抗四環(huán)素，說(shuō)明這些細(xì)菌中導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。