Question

【題目】已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，某制藥廠根據如圖所示的流程圖生產預防和治療該傳染病的單克隆抗體，請據圖回答有關問題：

（1）單克隆抗體的特性有_______________，其制備過程運用了_________和_______________的動物細胞工程技術。

（2）上圖中常用的化學促融劑是____________，假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成____________種類型的融合細胞，因此需要特定的HAT培養基篩選出雜交瘤細胞用于培養。已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷，淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖，骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，能無限分裂增殖，則HAT培養基中應添加____________才具有篩選雜交瘤細胞的作用。

（3）經克隆化培養和抗體篩選后獲得的雜交瘤細胞具有的特點是_______________________。

（4）在大規模培養過程中，為保證細胞處于無菌無毒的環境，除了對培養液進行滅菌、添加一定量的抗生素外，還要_________________，以防止細胞代謝產物積累對細胞自身造成傷害。

Answer 1

【答案】特異性強，靈敏度高，能大量制備 動物細胞融合 動物細胞培養 聚乙二醇（PEG） 三 氨基嘌呤 既能無限增殖，又能產生所需的專一抗體 定期更換培養液

【解析】

單克隆抗體的制備過程：

1.免疫動物：用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生B淋巴細胞。

2.細胞融合：將準備好的同系骨髓瘤細胞與B淋巴細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

3.選擇性培養：選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶（S途徑），不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶（S途徑），但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從淋巴細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶（S途徑），并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

4.雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化：在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。

5.單克隆抗體的大量制備：主要采用動物體內誘生法和體外培養法。

(1)體內誘生法：在小鼠腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，并產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

(2)體外培養法：將雜交瘤細胞置于培養瓶中進行培養。在培養過程中，雜交瘤細胞產生并分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體具備特異性強，靈敏度高，可大量制備的特點，在制備過程中需應用動物細胞融合和動物細胞培養等動物細胞工程技術完成制備。

（2）動物細胞融合所應用促融劑為聚乙二醇，也可利用離心、振動、電激或滅活的病毒處理細胞，加速融合。融合后的細胞有三種：雜交瘤細胞、骨髓瘤-骨髓瘤細胞、淋巴-淋巴細胞。要篩選出雜交瘤細胞，需阻斷骨髓瘤細胞能夠進行的D途徑，即在培養基中加入氨基嘌呤，阻止其增殖。

（3）雜交瘤細胞的特點：既能無限增值，又可以產生所需的專一抗體。

（4）想要保證細胞培養過程中的環境安全，不僅要加入適量抗生素抑制外來細菌，也需要定期更換培養液防止細胞代謝產物的積累對細胞造成傷害。