Question

【題目】重疊延伸PCR技術是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過多次PCR擴增，從而獲得目的基因的方法。該技術在擴增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點誘變等方面具有廣泛的應用前景。右圖是利用重疊延伸PCR技術擴增某目的基因的過程。其主要沒計思路是用具有互補配對片段的引物（圖中引物2、引物3），分別PCR，獲得有重疊鏈的兩種 DNA片段，再在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸獲得目的基因。結合所學知識，分析下列問題。

（1）引物中G+C的含量影響著引物與模板DNA結合的穩定性，引物中G+C的含量越高，結合穩定性______。

（2）在第一階段獲得兩種具有重疊片段DNA的過程中，必須將引物l、2和引物3、4置于不同反應系統中，這是因為________。

（3）若在引物l和引物2組成的反應系統和引物3、引物4組成的反應系統中均復制一次，共產生________種雙鏈DNA分子。

（4）在引物1、引物2組成的反應系統中，經第一階段形成圖示雙鏈DNA至少要經過________ 次復制。

（5）若利用微生物擴增該目的基因，其基本步驟包括：________、________、微生物的篩選和培養、從菌群中獲取目的基因。

Answer 1

【答案】

（1）越高

（2）吸引物2和吸引物3存在互補配對片段，置于同一反應系統中它們會發生結合而失去作用

（3）3

（4）2

（5）基因表達載體的構建 將目的基因進入受體細胞

【解析】

（1）由于一個C-C之間有三個氫鍵，而一個A-T之間有兩個氫鍵，所以引物中C+C含量越高，引物與模板DNA的結合就越穩定．

（2）從圖中可以看出，引物2和引物3相應的堿基之間可以進行配對，所以如果將引物2和3放在一個反應系統中，則會引起引物2和3 的失效．

（3）兩個反應系統中各自形成兩種DNA分子，但由于引物1和引物4形成兩個與原DNA相同的DNA分子，所以含有引物1和4的DNA屬于同一種DNA，故總共形成三種DNA分子．

（4）第一次復制形成的兩個DNA分子分別含有引物1和引物2，圖中第一階段形成的DNA分子同時具有引物1和引物2，圖示雙鏈DNA分子至少要經過第二次復制才能形成．

（5）利用微生物擴增該目的基因，需要將目的基因導入受體細胞，而導入受體細胞首先要將目的基因與載體結合．