Question

【題目】Bt基因即是蘇云金芽孢桿菌(Badcillus thuringiensis,簡稱Bt)基因,因其表達產物Bt毒蛋白具有殺蟲效果好、安全、高效等優點而成為應用最為廣泛的轉殺蟲基因。下圖為培育轉Bt基因苗的基本操作過程。

(1)Bt基因可從構建的Bt基因組文庫中獲取,也可以從其cDNA文庫中獲取,若利用PCR技術從cDNA文庫中獲取Bt基因（若Bt基因序列已知）,則在PCR體系中需加入的引物序列通常為____種。

(2)在構建基因表達載體的過程中,為了方便篩選含有目的基因的細胞,作為載體的Ti質粒應含有____基因,其中____是驅動基因轉錄的酶識別和結合的位點,而能幫助目的基因整合到宿主細胞染色體上的序列稱為______。圖示將目的基因導入受體細胞的方法是_______。

Answer 1

【答案】2標記(抗性)啟動子T-DNA(可轉移DNA)農桿菌轉化法

【解析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）若利用PCR技術從cDNA文庫中獲取Bt基因，需根據Bt蛋白氨基酸序列設計引物，引物的序列可以有多種，原因是一種氨基酸可能有多種密碼子，對應生物DNA堿基序列就會有多種。在PCR體系中需加入其中的全部引物，若Bt基因序列已知，則引物的序列通常為2種。

（2）標記基因是作用是鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞；啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結合的位點，驅動轉錄；T-DNA的作用是幫助目的基因整合到宿主細胞染色體上；將目的基因導入受體細胞的方法是農桿菌轉化法。