Question

【題目】我國基因工程藥物的研制和生產發展迅猛，下圖是利用基因工程方法生產人生長激素的示意圖。據圖回答下列問題（限制酶 PstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）過程②必需的酶是__________酶，過程④必需的酶是__________酶。⑤為提高成功率，常用__________溶 液處理大腸桿菌細胞。

（2）為了使目的基因和質粒 B 定向連接并且有利于受體細胞的篩選，酶 1 是____ 。

（3）如果用限制酶 PstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ對質粒 A 進行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割 時，則形成的 DNA 片段共_種，含有完整四環素抗性基因的 DNA 片段的概率是__________。

（4）作為受體的大腸桿菌細胞內，應不含____ 基因，以利于篩選出含重組載體的受體菌。

（5）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程____ ，為什么？____ 。

Answer 1

【答案】(1)反轉錄（逆轉錄） DNA連接酶 CaCl2（2）EcoRⅠ （3）9 1/3

(4)tctR（四環素抗性）（5）不能利用人的皮膚細胞來完成①過程，因為生長激素基因不在人皮膚細胞中表達，在垂體細胞中表達。

【解析】

試題

（1）過程②是指由RNA獲得DNA的過程，為逆轉錄過程，需要逆轉錄酶；過程④為目的基因與運載體結合成重組質粒，需要DNA連接酶；⑤為把重組DNA分子導入大腸桿菌中，一般要用CaCl2溶液處理大腸桿菌細胞。

（2）為了使目的基因和質粒B定向連接，并且有利于受體細胞的篩選，限制酶I與另一端的限制酶PstⅠ不同，分析質粒可知，酶I只能是限制酶EcoRⅠ。

（3）用一種限制酶進行切割，由于3種酶的切割位點不同，因此能得到三種DNA片段；用兩種限制酶進行切割時，能得到六種DNA片段；用三種限制酶同時切割，得到的DNA片段共有三種，與用兩種酶切割后的片段重復，因此共得到9種片段；這9中片段中，有3種片段含有完整四環素抗性基因，所占比例為1/3。

（4）作為受體的大腸桿菌應該不含標記基因，由于ampR基因被破壞，tctR基因為標記基因，故受體菌中不含tctR基因。

（5）不能用人的皮膚細胞獲取生長激素mRNA，因為在人的皮膚細胞中生長激素基因不表達，不能獲得生長激素的mRNA。