Question

【題目】CAR--T細胞療法是通過設計CAR基因，并導人癌癥患者的T細胞中，使其轉化為CAR-T細胞，CAR--T細胞膜上的CAR蛋白與癌細胞表面抗原特異結合后，激活CAR-T細胞使其增殖、分化，從而實現對癌細胞的特異性殺傷和記憶。主要過程如下圖。請回答：

（1）要獲取CAR基因，可采取PCR技術進行大量擴增，前提是_________________________。

（2）將CAR基因導人患者T細胞前，需完成過程[①]___________________該過程中先要用___________切割含有CAR基因的DNA片段和_______， 以形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接形成pCDH-CAR， pCDH- -CAR上除了目的基因外，還有一些必須的部分，比如_________________，它是RNA聚合酶識別和結合的部位。

（3）完成過程②常用方法是____________法。此外，還可以先將CAR基因整合到逆轉錄病毒載體中，再利用病毒的________________性導人并將CAR基因整合到T細胞的_________________上。

（4）檢測CAR- T 細胞中的CAR基因是否轉錄出了mRNA所采用的方法是_________________________。

（5）在將CAR--T細胞輸給病人進行治療之前，還需在實驗室內進行細胞擴增培養。體外培養CAR-T細胞的培養液中除合成培養基的成分外，一般還需添加_____________________________________等天然成分。

Answer 1

【答案】CAR基因序列已知 構建基因表達載體 限制性核酸內切酶 pCDH質粒 啟動子 顯微注射 侵染 染色體DNA 分子雜交技術 血清（血漿）

【解析】

根據題意可得，CAR-T細胞療法實際為通過基因工程改變患者T細胞的基因，使其能夠產生CAR蛋白以特異性殺傷癌細胞。過程①表示獲得重組DNA分子，過程②表示將重組DNA分子轉入受體細胞；過程③表示對癌細胞的特異性殺傷和記憶。

（1）利用PCR技術對CAR基因進行大量擴增的前提是CAR基因序列已知；

（2）CAR基因為目的基因，在將該基因導人患者T細胞前，需完成基因表達載體，即過程①；該過程需要用同種限制酶（限制性核酸內切酶）切割目的基因和運載體（pCDH質粒），以形成相同的黏性末端；基因表達載體上RNA聚合酶識別和結合的部位是啟動子；

（3）過程②表示將重組DNA分子轉入受體細胞，動物細胞常用方法為顯微注射法；病毒為寄生生物，故可以利用病毒的侵染特性導入并將CAR基因整合到T細胞的染色體DNA上；

（4）目的基因的檢測與鑒定的第二步是檢測目的基因（CAR）基因是否轉錄出了mRNA，方法是分子雜交技術；

（5）動物細胞培養時常加入血清（血漿）等天然成分。