Question

【題目】如圖所示，在一段未知序列的突變體 DNA 片段中，插入了已知序列的 T-DNA，要想對 T-DNA 兩側的未知序列進行測序，下列做法正確的是（ ）

A.用引物①和引物④直接進行 PCR 擴增之后在測序

B.用引物②和引物③直接進行 PCR 擴增之后在測序

C.用 DNA 連接酶連接成環狀后，再用引物①④PCR 擴增后測序

D.用 DNA 連接酶連接成環狀后，再用引物②③PCR 擴增后測序

Answer 1

【答案】C

【解析】

用PCR進行擴增檢測時，引物要選在檢測序列兩側，并從子鏈的5‘端開始復制

A，直接選用引物①、④組合進行PCR，引物選擇方向相反，無法完成擴增，A錯誤；
B、D，用引物②和引物③可實現對已知的T-DNA序列進行擴增，達不到預期目的，B、D錯誤；
C、用 DNA 連接酶連接成環狀后，用引物①④PCR 擴增后測序，恰好可擴增出T-DNA兩側的未知序列，C正確；

故選C。