Question

【題目】下圖為三種質粒和一個含目的基因的DNA片段，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，EcoRⅠ（0.7Kb），PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割位點與復制原點之間的距離．已知1kb=1000個堿基對的長度．

（1）片段D為目的基因中的某一片段，則DNA聚合酶和DNA連接酶的作用部位依次是（填數字）．
（2）圖中能作為目的基因運載體最理想的質粒是（填A/B/C）．據圖分析，其他兩種質粒一般不能作為運載體的理由分別是 ．
（3）用EcoRⅠ酶切目的基因和質粒B形成的重組質粒，并進行電泳觀察，可出現長度分別為1.1kb和kb的兩個片段，或者長度分別為的兩個片段．
（4）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，進行大腸桿菌受體細胞導入操作，之后，受體細胞的類型（對抗生素表現出抗性R或敏感性S，藍白代表菌落顏色）包含（ ）（多選）
A.ApR ， 藍色
B.ApR ， 白色
C.ApS ， 藍色
D.ApS ， 白色
（5）動物基因工程通常以受精卵作為受體細胞的根本原因是（ ）
A.受精卵細胞能使目的基因高效表達
B.受精卵可發育成動物個體
C.受精卵基因組更易接受DNA的插入
D.受精卵尺寸較大，便于DNA導入操作

Answer 1

【答案】
（1）②、②
（2）B；質粒A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被破壞
（3）5.6；3.1kb和3.6kb（或3.6kb和3.1kb）
（4）ABD
（5）B
【解析】解：（1）DNA聚合酶和DNA連接酶的作用部位均為磷酸二酯鍵，即圖中部位②．（2）圖中質粒A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制．因此，能作為目的基因運載體最理想的質粒是B．（3）目的基因和質粒B形成的重組質粒長度為2.7﹣0.1+（4.0﹣1.0）=5.6kb（質粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的大片段）、0.1+1.0=1.1kb（質粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時形成的小片段）或2.7﹣0.1+1.0=3.6（質粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的小片段）、0.1+3.0=3.6（質粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時形成的大片段）．（4）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，導入大腸桿菌的可能是普通質粒，也可能是重組質粒，也可能是目的基因自身連接的DNA環．如果導入的是普通質粒，受體細胞的類型為A（ApR、藍色）；如果導入的是重組質粒，受體細胞的類型為B（ApR、白色）；如果導入的是目的基因自身連接環，受體細胞的類型是D（ApS、白色）．（5）動物基因工程通常以受精卵作為受體細胞的根本原因是受精卵可發育成動物個體．
所以答案是：（1）②、②（2）B 質粒A缺少標記基因 質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被破壞（3）5.6 3.1 kb和3.6kb （或3.6kb和3.1kb）（4）ABD（5）B
【考點精析】關于本題考查的基因工程的原理及技術，需要了解基因工程的原理是利用DNA重組技術才能得出正確答案．