Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的_______。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到 ____期時，可從_______分離出ES細胞。

（3）步驟③中，需要構建含有基因Rag2的表達載體。可以利用_______擴增Rag2基因片段。用Hind III和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有______和_______的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的_________________，用_______進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】 細胞核 囊胚 內細胞團 PCR技術 HindⅢ PstI 蛋白質 抗Rag2蛋白的抗體

【解析】試題分析：本題結合圖解，綜合考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求學生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節問題；識記核移植的具體過程；識記體外受精的具體過程及早期胚胎發育的過程，能結合所學的知識準確答題。分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞。

（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到囊胚期，可從其內細胞團分離出ES細胞。

（3）步驟③是將目的基因導入ES細胞，該過程之前需要構建基因表達載體；可以根據基因Rag2的核苷酸序列設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindIII和PstI酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因是否表達，可提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。