Question

下面是某同學做自生固氮菌分離實驗的方案和觀察結果：

NaNO3:2g	K2HPO4: 1g
KCl: 0.5g	MgSO4: 0.5g
FeSO4:0.01g	蔗糖：30g
瓊脂：15~20g	蒸餾水：1 000 mL

一、實驗目的（略）

二、實驗材料和用具（略）

三、實驗方法和步驟

1.接種

（1）接種前，準備好盛有配方如上表的培養基，放入培養皿中并滅菌，供實驗用。

（2）取10 g土壤，放在無菌研缽中，注入5 mL蒸餾水，并用無菌玻璃棒攪拌均勻，備用。

（3）將接種環放在酒精燈的火焰上滅菌。將培養皿蓋輕輕放在桌面上，手拿培養皿。將接種環放在培養基邊緣處冷卻。然后，用接種環蘸取少許泥漿，輕輕地點接在培養基的表面上，共點接15~20處。

（4）接種后，輕輕地蓋上培養皿蓋，將培養皿放在實驗桌上。

2.培養

將接種過的培養皿放入恒溫箱內，在室溫下培養3~4 d。

3.觀察

3~4 d后，取出培養皿，仔細觀察培養基上的菌落，其中大而扁平、邊緣呈波狀或鋸齒狀并為褐色菌落的為自生固氮菌。

4.鏡檢（略）

該實驗方案和觀察結果中有幾處明顯錯誤，請指出并改正。

Answer 1

①培養基的配方中含有氮源是錯誤的，應將NaNO₃改為不含氮的鈉鹽。

②實驗步驟接種（2）中用蒸餾水是錯誤的，應改為無菌水。

③實驗步驟（3）中將培養皿蓋放在桌面上是錯誤的，應改為略微打開培養皿蓋。

④實驗步驟接種（4）中沒有寫實驗內容、接種人的姓名和日期，應加上這些內容。      ⑤實驗步驟培養中，應將“在室溫下培養3~4 d”改為“在28~30 ℃的溫度下培養3~4 d”。⑥實驗步驟觀察中“仔細觀察培養基上的菌落，其中大而扁平、邊緣呈波狀或鋸齒狀并為褐色菌落”是錯誤的。應改為“仔細觀察培養基上稀泥漿周圍出現的黏液。黏液初為無色透明，后為乳白色，最后變為褐色”。

解析:

考查對自生固氮菌分離實驗的掌握：（1）自生固氮菌分離實驗的原理是：將用表土制成的稀泥漿，接種到無氮培養基上進行培養。在這種情況下，只有自生固氮菌才能正常生長繁殖。

（2）分離自生固氮菌的步驟：①接種：取滅菌的無氮培養基，在無菌研缽中用無菌水（而不是蒸餾水）制備稀泥漿，接種時培養皿蓋應略微打開以防空氣中雜菌進入，接種后蓋上培養皿蓋，并在蓋上寫明實驗內容、接種人的姓名和日期。

②培養：將培養皿移入恒溫箱內，28~30 ℃的溫度下培養3~4天。

③觀察：觀察培養基上稀泥漿周圍出現的培養物——黏液，黏液初為無色透明，后為乳白色，最后變為褐色，表明含有自生固氮菌。根據題干內容和以上步驟、原理進行對比，即可找出其中錯誤之處。