Question

【題目】一種新型融合蛋白蜂毒素一SP94，具有較好的靶向性和毒素活性，為肝癌的靶向性治療提供了新的思路。它是將蜂毒素與SP94組合序列優化改造成熟，再轉換成序列長度為150bp的DNA序列并與pET32a質粒構建表達載體，流程如下圖。在大腸桿菌中，重組質粒能表達出新型融合蛋白蜂毒素一SP94。請回答。

pET32a蜂毒素SP94表達載體構建流程圖

（1）根據蜂毒素和SP94成熟肽的________序列，先將該序列轉換成________，再通過逆轉錄得到________片段。要獲得大量的該片段可以通過_____技術進行擴增。

（2）將目的基因片段和質粒用限制酶_________進行雙酶切，回收目的基因片段與質粒的片段，用___________連接，得到含有目的基因的重組質粒，轉入經_________處理過的大腸桿菌細胞培養。

（3）為了鑒別受體細胞中是否導入質粒，可用含_____的培養基進行篩選。從篩選出的大腸桿菌中，獲取質粒并對其進行酶切鑒定，雙酶切后，若測到長度為_________DNA片段，就說明該大腸桿菌中的質粒含有目的基因。

Answer 1

【答案】氨基酸 mRNA Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因 PCR KpnⅠ和XhoⅠ DNA連接酶 Ca2+處理過 氨芐青霉素 150bp

【解析】

基因工程的基本操作程序

1、目的基因的獲取：原核基因采取直接分離獲得；真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法；PCR技術擴增目的基因。

2、基因表達載體的構建

3、將目的基因導入受體細胞

4、目的基因的檢測和表達

（1）從圖中看出，目的基因的獲取是通過人工合成，成熟肽的基本組成單位是氨基酸，所以可以根據其氨基酸序列轉換成mRNA序列，通過你轉款獲得DNA片段（Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因）。要獲得Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因可以通過PCR技術進行擴增。

（2）比較重組質粒和正常質粒的結構，可以分析出用限制酶KpnⅠ和XhoⅠ切割的目的基因片段和質粒，形成相同的黏性末端，在用DNA連接酶進行連接，轉入大腸桿菌之前需要用Ca2+處理受體細胞。

（3）該質粒上有氨芐青霉素作為標記基因，所以可以在含有氨芐青霉素的培養基上進行篩選。從題干中看出目的基因的序列有150bp。