Question

【題目】抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療。凝乳酶是奶酪生產中的關鍵性酶。下列是生產這兩種酶的相關思路，請回答下列問題：

(1)圖1為通過培育轉基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①圖中過程a指的是利用______法將目的基因導入受精卵，受體細胞不選用體細胞的理由是______。

②在胚胎移植前，需進行____________，目的是確定要培育的個體能產奶。

③可采用________法來鑒定牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。

(2)從牛胃液中分離得到的凝乳酶以其催化能力強而被廣泛應用，研究人員運用基因工程技術，將編碼該酶的基因轉移到了微生物細胞中。

①從牛胃細胞中提取mRNA，再通過________形成cDNA。以此cDNA為模板通過PCR擴增目的基因，有時需要在引物的5′端設計________(填“限制酶”、“DNA連接酶”或“RNA聚合酶”)識別序列，以便構建重組DNA分子。

②為提高重組DNA分子的比例，在構建重組DNA分子(如圖2所示)時最好選用______________作限制酶。

③經研究發現，如果將該凝乳酶的第20位和24位氨基酸變為半胱氨酸，則其催化能力將提高2倍。現已知通過蛋白質工程可生產高效凝乳酶，請寫出有關制備步驟：___________。

Answer 1

【答案】 顯微注射 動物體細胞的全能性一般不能表現 性別鑒定 抗原—抗體雜交 逆轉錄 限制酶 BamH Ⅰ和PstⅠ 找到相對應的脫氧核苷酸序列→定向改造凝乳酶基因→將改造后的凝乳酶基因導入受體細胞等(答案合理即可)

【解析】(1)圖1是培育轉基因牛的簡易流程圖，所以a過程指的是將目的基因導入受精卵，采用的方法為顯微注射法。動物體細胞的全能性一般不能表現，所以選擇受精卵作為受體細胞。只有母牛才能產奶，所以進行胚胎移植前需要對胚胎進行性別鑒定。鑒定牛奶中是否含有目標蛋白，常采用抗原—抗體雜交法。(2)以RNA為模板獲得DNA的過程稱逆轉錄。PCR技術用于快速擴增目的基因，而基因工程中只需用限制酶來切割DNA。 目的基因兩末端堿基序列不同以及切開的質粒兩末端堿基序列不同才能避免各自的自連，進而提高重組DNA的比例。