Question

【題目】科學家將外源目的基因與大腸桿菌的質粒進行重組，并在大腸桿菌中成功表達。下圖表示構建重組質粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請據圖回答問題：

(1)步驟①和②中常用的工具酶是________________和________________。

(2)經過①和②步驟后，有些質粒上的________________基因內插入了外源目的基因，形成重組質粒。

(3)步驟③是________________的過程。為了促進該過程，應該用________處理大腸桿菌。

(4)步驟④是將三角瓶內的大腸桿菌接種到含有四環素的培養基A上培養，目的是篩選________________。能在A中生長的大腸桿菌有________種。

(5)步驟⑤是用無菌牙簽挑取A上的單個菌落，分別接種到B(含氨芐青霉素和四環素)和C(含四環素)兩個培養基的相同位置上。一段時間后，菌落的生長狀況如上圖所示。含有目的基因的菌落位于(填“B”或“C”) ________上，請在圖中相應位置上圈出來。

__________

Answer 1

【答案】（1）限制性內切酶、DNA連接酶

（2）氨芐青霉素抗性

（3）將重組質粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞） CaCl2溶液

（4）含四環素抗性基因的大腸桿菌 2種

（5）E （圈兩個菌落2分）

【解析】試題分析：

（1）步驟①表示用限制酶切割質粒和含目的基因的DNA片段，步驟②表示用DNA連接酶將目的基因與質粒連接起來。

（2）由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨芐青霉素抗性基因中。

（3）步驟③表示將重組質粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞）；為了促進該過程，應該用CaCl2溶液處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞。

（4）培養基C是選擇培養基，其中含有四環素，專一篩選含四環素抗性基因的大腸桿菌；能在C中生長的大腸桿菌有2種，分別是抗四環素和同時抗四環素和抗氨芐青霉素的大腸桿菌。

（5）D培養基中大腸桿菌對四環素和氨芐青霉素都有抗性，而E中的大腸桿菌只抗一種四環素，所以在E中對應區域（D中沒有菌落的部位），該處為轉基因大腸桿菌。