Question

【題目】GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，對損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營養(yǎng)和保護作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖1所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請回答：

（1）在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是 。

（2）基因工程中最常用的載體是 。構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時，需選擇圖1中的 限制酶進行酶切�；�因表達(dá)載體中必須有啟動子、 、 等三部分。

（3）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對篩選的載體進行雙酶切，并對酶切后的DNA片段進行電泳分析，結(jié)果如圖2所示。圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。

（4）將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞的方法是 。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定的密度時，需進行 培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞。

（5）科學(xué)家使用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物時通常將藥用蛋白基因與 等調(diào)控組件重組在一起導(dǎo)入哺乳動物的受精卵中，使轉(zhuǎn)基因動物通過分泌的乳汁來生產(chǎn)藥物，此轉(zhuǎn)基因動物被稱作 。

Answer 1

【答案】

（1）使細(xì)胞分散開

（2）質(zhì)粒 XhoI 終止子 標(biāo)記基因 目的基因

（3）②

（4）顯微注射技術(shù) 傳代

（5）乳腺蛋白基因的啟動子 乳腺生物反應(yīng)器

【解析】

試題分析：

（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)時，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶作用，使細(xì)胞分散開。

（2）質(zhì)粒上有XhoⅠ識別位點，而且在啟動子之后，所以選用XhoⅠ限制酶進行酶切。

（3）泳道①僅有一種條帶，屬于載體自連；泳道②有兩種條帶，且長度分別與質(zhì)粒和GDNF基因長度相同，為正向連接；泳道③有兩種條帶，長度與BamHⅠ酶切后結(jié)果相同，為反向連接。

（4）將目的基因?qū)�入動物受體細(xì)胞常用的方法是顯微注射技術(shù)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到一定程度，需要進行分瓶，進行傳代培養(yǎng)。

（5）通常將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起導(dǎo)入哺乳動物的受精卵中，使轉(zhuǎn)基因動物通過分泌的乳汁來生產(chǎn)藥物，此轉(zhuǎn)基因動物被稱作乳腺生物反應(yīng)器。