Question

【題目】幽門螺桿菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素，其不良預后是胃癌。據研究發現，目前我國有超過50%人感染了Hp病菌。Hp是微需氧菌，環境氧要求5%～8%，在大氣或絕對厭氧環境下均能生長，Hp的尿素酶極為豐富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保護細菌在高酸環境下生存。在患者體內采集樣本并制成菌液后，進行分離培養。實驗基本步驟如下：配制培養基→滅菌、倒平板→X→培養→觀察。請回答：

（1）在配制培養基時，要加入尿素和________________指示劑，這是因為Hp能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現紅色環帶。

（2）步驟X的操作如圖所示：

①圖中所用微生物接種的方法是__________________________。

②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是_______________。

③下列關于此實驗的操作，正確的是____________。

A．高壓蒸汽滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B．含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養基滅菌后，冷卻至室溫倒平板

C．取103、104、105倍的稀釋液和無菌水各0．1mL，分別涂布于各組平板上

D．在皿蓋上用記號筆做標記

（3）在培養時，需將培養皿_____并放在恒溫培養箱中，否則將可能導致無法形成單一菌落。

（4）臨床上14C呼氣試驗檢測是一種安全、準確的檢測Hp的方法，其基本原理是當被檢測者服用含有_________________的膠囊后，如患者的胃內存在Hp感染，則可將其分解為氨和14CO2。

（5）某同學將分離得到的Hp擴大培養，對其進行計數。取1 mL菌液稀釋106倍后再各取0．1 mL分別涂布在3個培養基上，培養一段時間后，其菌落數分別為180、220、200個，則每升菌液中Hp的數量_________個，此方法測定的活菌數比實際活菌數少的原因為________________。

Answer 1

【答案】酚紅指示劑 稀釋涂布平板法 使微生物和無菌水混合均勻 C 倒置 14C標記尿素 2×1012 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落

【解析】

微生物的研究通常包含微生物的獲得、分離純化、培養以及保存等。單菌落分離法包含劃線分離法和涂布分離法，常用于分離獲得單菌落。通常是細菌在固體培養基上（內）生長發育，形成以母細胞為中心的一團肉眼可見的、有一定形態、構造等特征的子細胞的集團，稱之為菌落。

（1）由于Hp含有尿素酶，尿素酶能將尿素分解成氨，而氨會使培養基堿性增強，即pH升高，導致酚紅指示劑變紅。

（2）①微生物接種的方法很多，但都要注意防止雜菌的污染；接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖示所示為稀釋涂布平板法。

②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻。

③A、高壓蒸汽滅菌加熱結束時，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯誤；

B、含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養基滅菌后，冷卻至50℃左右倒平板，不需要冷卻到室溫，B錯誤；

C、取103、104、105倍的稀釋液和無菌水各0．1mL，分別涂布于各組平板上，C正確；

D、用記號筆標記培養皿中的菌落時，應標記在皿底上，D錯誤。

故選C。

（3）在培養時，需將培養皿倒置并放在恒溫培養箱中，倒置培養基的目的也是為了獲得單一菌落。

（4）如果人感染了Hp，能將尿素分解為NH3和CO2，因而用14C標記尿素中的C，可通過呼吸產物來判斷是否感染Hp。

（5）1 L菌液中Hp的數量=（180+220+200）÷3÷0．1×106×103=2×1012（個）；用稀釋涂布平板法統計的菌落數往往比活菌的實際數目低的原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。