Question

【題目】某一質粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導致相應的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環素抗性基因）．有人將此質粒載體用BamHI酶切后，與用BamHI酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應，用得到的混合物直接轉化大腸桿菌，結果大腸桿菌有的未被轉化，有的被轉化．被轉化的大腸桿菌有三種，分別是含有環狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌．回答下列問題：
（1）限制性核酸內切酶作為基因工程的工具，其作用特點是 ．
（2）如果用含有氨芐青霉素的培養基進行篩選，在上述四種大腸桿菌細胞中，未被轉化的和僅含有環狀目的基因的細胞是不能區分的，其原因是；并且和的細胞也是不能區分的，其原因是 ． 在上述篩選的基礎上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有的固體培養基．
（3）基因工程中，某些噬菌體經改造后可以作為載體，其DNA復制所需的模板來自于 ．

Answer 1

【答案】
（1）識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開
（2）二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均不生長；含有質粒載體；含有插入了目的基因的重組質粒（或重組質粒）；二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均能生長；四環素
（3）噬菌體
【解析】解：（1）限制性核酸內切酶作為基因工程的工具，限制酶能識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開．（2）由于未被轉化的和僅含有環狀目的基因的大腸桿菌中不含有氨芐青霉素抗性基因，因此如果用含有氨芐青霉素的培養基進行篩選，未被轉化的和僅含有環狀目的基因的大腸桿菌均不能存活，因此兩者是不能區分的；含有質粒的大腸桿菌和 含重組質粒的大腸桿菌的細胞由于均含有氨芐青霉素抗性基因，在含有氨芐青霉素的培養基上都能生長，因此兩者也是不能區分的．在上述篩選的基礎上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有四環素的固體培養基，即含有重組質粒的大腸桿菌在其中不能生長，而含有普通質粒的大腸桿菌能生長．（3）基因工程中，某些噬菌體經改造后可以作為載體，其DNA復制所需的模板來自于噬菌體，原料來自于受體細胞． 所以答案是：（1）識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開；（2）二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均不生長；含有質粒載體；含有插入了目的基因的重組質粒（或重組質粒）；二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均能生長；四環素；（3）噬菌體
【考點精析】解答此題的關鍵在于理解基因工程的原理及技術的相關知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．