Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tetR表示四環素 抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，直線所示為BamH I、HindⅢ、Sma I三種限制酶的酶切位點。據圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用 限制酶同時切害繊體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含 的培養基上進行。能驅動人乳鐵蛋白基因在牛的乳腺細胞中特異性表達的調控因子是圖中的 。過程①采用的操作方法通常是 。

（2）過程②采用的生物技術是 ，對早期胚胎進行切割，經過程②可獲得多個新個體，進行胚胎分割時，應選擇發育良好，形態正常的 進行分割，目前最常見的是經分割產生的同卵 胎。

（3）對代孕牛的要求是 。

Answer 1

【答案】（1）HindⅢ,和BamHI 氨芐青霉素 啟動子 顯微注射法

（2）胚胎移植 桑椹胚或囊胚 雙

（3）體質健康且繁殖能力正常

【解析】

試題分析：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點，其中限制酶SmaI的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHⅠ。用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質粒后，會破壞質粒上的四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養基上進行。啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度。過程①是將重組質粒導入動物細胞的過程，常用顯微注射法。

（2）過程②是將早期胚胎移入代孕牛的體內，利用的是胚胎移植的技術。胚胎分割時應選擇發育良好、形態正常的桑椹胚或囊胚。

（3）代孕牛要有健康體質和正常繁殖能力。