Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tetR表示四環素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三種限制酶。請據圖回答：

（1）從高表達人乳鐵蛋白的組織細胞中提取mRNA，通過______過程獲得cDNA，用于PCR擴增。

（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用______限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌，首先需要在含______的培養基上進行。

（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是_____（填字母代號）。

A．啟動子 B．tetR C．復制原點 D．ampR

（4）進行過程②之前，需用相應的激素處理代孕牛，使其處于______狀態。

（5）對早期胚胎進行切割，可獲得多個新個體，該種生殖方式屬于_____生殖。

（6）為檢測人乳鐵蛋白基因是否轉錄，可采用______技術。

Answer 1

【答案】逆轉錄 BamHⅠ和HindⅢ 氨芐青霉素 A 同期發情 無性生殖（克隆） （DNA—RNA）分子雜交

【解析】

分析題圖：圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線，包括基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、早期胚胎培養、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質粒導入受體細胞；過程②需采用胚胎移植技術。

（1）以mRNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉錄。
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、Hindlll、Smal的切割位點，其中限制酶Smal的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHI。用限制酶HindⅢ和BamHI切割質粒后，會破壞質粒上的四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養基上進行。
（3）啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列，A正確。故選A。
（4）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；進行胚胎移植前，需要用相應的激素處理代孕牛，使其處于同期發情狀態。
（5）來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質，因此胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。
（6）檢測目的基因是否轉錄常用分子雜交技術。