Question

【題目】如圖是含某目的基因的DNA片段，據圖回答下列問題：

（1）若用EcoRⅠ限制酶獲取其中的目的基因，其識別核苷酸序列及切割位點是___________。該DNA片段經切割后共形成_______個_____________（填“平”或“黏性”）末端。

（2）若圖示DNA片段中EcoRⅠ限制酶識別序列的一個堿基突然改變，則可能發生的情況是_______________________________________。

（3）使用________________連接目的基因和載體，連接的是圖中________(填字母)部位的___________________（化學鍵）。

（4）為了避免目的基因和質粒在酶切后產生的末端發生任意連接，需用兩種限制酶XbaI和SacI(兩種酶切出的粘性末端不同)同時切割含目的基因的DNA片段和質粒。若用Ti質粒作為目的基因的載體，應選用下圖中何種Ti質粒？ _______________

Answer 1

【答案】 —G↓AATTC— 4 黏性 此DNA片段中無EcoRⅠ限制酶的識別序列 DNA連接酶 X 磷酸二酯鍵 甲

【解析】本題考查基因工程的知識，主要考查基因工程的基本操作程序，要求考生能識記基本操作的四個步驟，理解每個步驟的操作要點、使用工具及要達到的目的，同時能利用所學知識分析圖形，進行正確的分析判斷。

（1）限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；不同限制酶識別的核苷酸序列和切割位點有差異，來自大腸桿菌的EcoRⅠ限制酶識別的核苷酸序列及切割位點是—G↓AATTC—，由于題圖的DNA片段含有兩處EcoRⅠ限制酶的識別序列（分別位于目的基因的左右兩側），因此可用EcoRⅠ限制酶從圖中DNA獲取其中的目的基因，該DNA片段經切割后共形成4個黏性末端。

（2）限制酶識別的核苷酸序列具有特異性，若圖示DNA片段中EcoRⅠ限制酶識別序列的一個堿基突然改變，突變后的序列與突變前的序列不同，則此DNA片段中無EcoRⅠ限制酶的識別序列。

（3）圖中X處是不同核苷酸之間的磷酸二酯鍵，Y處是堿基對之間的氫鍵，Z處是核苷酸分子內部堿基與脫氧核糖之間的化學鍵，基因工程中使用DNA連接酶連接目的基因和載體，連接的是圖中X部位的磷酸二酯鍵。

（4）為了避免目的基因和質粒在酶切后產生的末端發生任意連接，需用兩種限制酶XbaI和SacI(兩種酶切出的粘性末端不同)同時切割含目的基因的DNA片段和質粒。若用Ti質粒作為目的基因的載體，則還要保證將目的基因插入T-DNA區段內部，才能實現T-DND攜帶目的基因整合到受體細胞染色體的DNA中，因此根據圖中T-DNA位置及對應的兩種限制酶，只有甲圖才符合要求。