Question

【題目】某些微生物能表達黃曲霉毒素B1（AFB1）解毒酶．將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性。下圖為采用基因工程技術生產AFB1解毒酶的流程圖。

據圖回答問題：

(1)過程I需要選擇含解毒酶的菌液中的細胞提取總RNA，理由是____________。

(2)過程Ⅱ中，需要用引物的原因是____________________________。

(3)構建酵母工程菌最常用的運載工具是____________，操作程序中關鍵環節是________，檢測酵母工程菌中AFB1解毒酶基因是否轉錄，應采用____________方法。

(4)采用蛋白質工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發，設計預期的____________，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的________________。

Answer 1

【答案】 菌液中含解毒酶，意味著細胞中解毒酶基因的正常（完成了）表達 DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，而只能從3’端延伸DNA鏈 質粒 構建基因表達載體 分子雜交 蛋白質結構 脫氧核苷酸序列

【解析】試題分析：圖示為采用基因工程技術生產AFB1解毒酶的流程圖，先用反轉錄法獲得目的基因，再利用PCR技術擴增目的基因，進而導入酵母菌、表達純化獲得AFB1解毒酶。

（1）由于菌液中含解毒酶，意味著細胞中解毒酶基因的正常（完成了）表達，所以過程l應選擇甲菌液的細胞提取總RNA。

（2）由于DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，而只能從3’端延伸DNA鏈，因此過程Ⅱ中，需要用引物。

（3）構建酵母工程菌時，常用的運載體是質粒，關鍵步驟是構建基因表達載體；轉錄的產物是mRNA，可以利用分子雜交法進行檢測。

（4）蛋白質工程的本質是通過基因改造或基因合成，所以設計預期的蛋白質結構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的脫氧核苷酸序列，從而提高酶的活性。