Question

(1)PCR(聚合酶鏈式反應)技術在生物工程中相當重要。請簡述PCR擴增目的基因的基本過程。______________________________。

(2)制備培養基方法：將蛋白胨、NaCl和牛肉膏放入燒杯內，加200 mL蒸餾水，用玻璃棒攪勻后，在酒精燈上加熱。當蛋白胨、牛肉膏溶化后，加入瓊脂，用微火繼續加熱至瓊脂熔化，補充水至200 mL。用0.1 mol/L的NaOH或0.1 mol/L的HCl將pH調至7.0～7.2，分別對培養基和培養皿進行高壓蒸汽滅菌。當培養基的溫度下降到50 ℃時，將其分裝在5套培養皿中，在酒精燈火焰附近倒平板，當培養基冷卻至室溫，按下表分別進行處理。將處理完畢的培養基置于35 ℃的溫度下培養2～3天，觀察每個培養基中的細菌生長情況。請回答下列問題：

第1套	開蓋，在空氣中暴露10 s
第2套	用手指接觸培養基約10 s
第3套	用硬幣接觸培養基約10 s
第4套	用濾紙擦一下課桌，再接觸培養基約10 s
第5套	(不打開蓋)

①上述實驗中有哪些是無菌操作______________。

②第5套培養皿的作用是________。如果其培養基表面有菌落生長，說明___________________。

③在1到4套的培養基中都出現了不同形態的菌落，原因是____________。

能否說菌落的形態越多，用來接觸的物體吸附的細菌數目就越多，為什么？

________________。

④實驗中，有三處特別強調溫度控制，請簡要說明其控制溫度的科學道理。

高壓蒸汽滅菌后“培養基的溫度下降到50 ℃時”才倒平板： ___________。

“當培養基冷卻至室溫，按下表分別進行處理”：____________________。

“將處理完畢的培養基置于35 ℃的溫度下培養”：_____________________________。

 

Answer 1

(1)目的基因DNA受熱變性成為單鏈→引物與單鏈結合成互補序列→在DNA聚合酶作用下延伸→重復循環完成擴增(其他合理答案亦可)

(2)①高壓蒸汽滅菌，在酒精燈火焰附近倒平板

②對照　培養基受到細菌污染

③培養基中接入了不同種類的細菌

不能，菌落的形態越多，只能說明接觸的物體中細菌的種類越多，菌落數越多才能說明細菌數多

④防止培養基的溫度過高使培養皿因受熱不均而破裂 防止培養基溫度過高殺死接種在其上的細菌(或微生物)　讓細菌在適宜的溫度下快速生長繁殖

 

(1)PCR的基本程序為三個環節：變性、復性、延伸。

(2)高壓蒸汽滅菌和無菌區操作是無菌技術的基礎操作，滅菌是否合格，通過空白培養基的培養可以對照說明。注意與問題聯系，分析表格中的信息。