Question

【題目】已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。人淋巴細胞中 有這兩種 DNA 的合成途徑，但一般不能無限增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有 S 途徑，但能不斷分裂增 殖。將這兩種細胞在培養(yǎng)皿中混合，加促融劑促進細胞融合，獲得雜種細胞，并生產(chǎn)單克隆抗體。請 回答：

（1）生產(chǎn)單克隆抗體時，一般不直接利用一個B淋巴細胞，主要原因是____。

（2）①過程中，常用的與植物細胞融合不同的誘導方法是____ 。

（3）②過程為_培養(yǎng)；為了從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，需在②過程向培養(yǎng)液中加入__________， 理由是雜交瘤細胞可利用____途徑合成 DNA，從而才能在該培養(yǎng)液中增殖。

（4）③過程的目的是選育出____ 細胞，需要進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，克隆化的方法最常用的 是有限稀釋法，即稀釋細胞到 7～10 個細胞／ml，每孔滴入____ （選填“0.1”或“1”或“10”） ml 細胞稀釋液。

（5）④表示雜交瘤細胞的擴大培養(yǎng)，其既可在體外培養(yǎng)，也可注射到小鼠____ 內(nèi)培養(yǎng)。體內(nèi)培養(yǎng)與體外培養(yǎng)相比，其優(yōu)點是____ 。

Answer 1

【答案】B 淋巴細胞不能無限增殖 滅活的病毒 動物細胞 氨基蝶呤 淋巴細胞中的 S 能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞 0.1 腹腔 無需再提供營養(yǎng)物質(zhì)以及無菌環(huán)境，操作簡便

【解析】

圖中顯示了單克隆抗體制備的過程，通過動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)以及根據(jù)題干信息設定特定培養(yǎng)基篩選出所需特異性抗體的雜交瘤細胞。單克隆抗體的制備中有兩次篩選：第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。

（1）淋巴細胞一般不能無限增殖，因此生產(chǎn)單克隆抗體時，一般不直接利用一個B淋巴細胞。

（2）動物細胞融合和植物細胞融合相同的誘導方法是物理法和化學法，動物細胞特有的誘導方法是用滅活的病毒。

（3）動物細胞融合后要進行動物細胞培養(yǎng)，且要進行篩選，從融合細胞中選出雜交瘤細胞，因為細胞合成 DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷，而人淋巴細胞中有這兩種 DNA 的合成途徑，但一般不能無限增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，因此在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤進行選擇，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，只有雜交瘤細胞可利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA，在該培養(yǎng)液中增殖。

（4）③過程的篩選目的是選出能能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞，克隆化培養(yǎng)常用有限稀釋法，即稀釋細胞到 7～10 個細胞／ml，為了達到單克隆培養(yǎng)的目的，則每個孔中不多于一個細胞，因此每孔滴入0.1 ml 細胞稀釋液。

（5）培養(yǎng)雜交瘤細胞可以體外培養(yǎng)，也可以在小鼠的腹腔內(nèi)培養(yǎng)，單克隆抗體的提取可以在體外培養(yǎng)液中或體內(nèi)的腹水中提取，體內(nèi)培養(yǎng)比體外培養(yǎng)具有無需提供營養(yǎng)物質(zhì)以及無菌環(huán)境，操作簡便的優(yōu)點。