Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中分別表示：tetR為四環素抗性基因，ampR表示氨芐青霉索抗性基因，以及BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。

據圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用____________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是____________。過程①可采用的操作方法是____________。為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用____________技術。

（2）過程②采用的生物技術是____________。在此之前，需要對代孕牛經過__________處理后，使之與供體的生理狀況保持相同。如果對胚胎進行性別鑒定，可選用囊胚期的___________細胞進行鑒定。

（3）用PCR技術擴增目的基因，其原理與細胞內DNA復制類似（如下圖所示）。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎。

①PCR技術擴增目的基因時從理論上推測，第四輪循環產物中含有引物A的DNA片段所占的比例為_______。

②在第____________輪循環產物中開始出現兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。

Answer 1

【答案】 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ 啟動子 顯微注射技術 抗原一抗體雜交 胚胎移植技術 同期發情 滋養層 15/16 三

【解析】試題分析：圖中顯示，該項技術應用了基因工程和胚胎工程的相關操作。據圖，僅將人乳鐵蛋白基因切割下來，需要在人乳鐵蛋白基因的左側用BamHⅠ切割，右側用HindⅢ切割。當人乳鐵蛋白基因和質粒連接成重組質粒后，tetR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要含氨芐青霉素的培養基上進行。

（1）要將人的乳鐵蛋白基因切割下來需要Hind Ⅲ和BamHⅠ，同時也要用這兩種酶處理質粒，以便構建重組質粒。而啟動子是基因表達調控的起始序列。將目的基因導入動物細胞一般采用顯微注射法；而人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原抗體雜交技術，檢測牛奶中是否含有人乳鐵蛋白。

（2）過程②采用的生物技術是胚胎移植技術。在此之前，需要對代孕牛經過同期發情處理后，使之與供體的生理狀況保持相同。如果對胚胎進行性別鑒定，可選用囊胚期的滋養層細胞進行鑒定。

（3）①PCR技術擴增目的基因從理論上推測，每一次循環產物中不含引物A的DNA只有如圖的最下面一個，其它的DNA均含有引物A，第四輪循環下來共得到16個DNA，含引物A的DNA片段所占的比例為15/16。

②在第三輪循環產物中開始出現兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。