Question

2．(17分)(2012·南昌一模)尿素是一種重要的農業肥料，需經細菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數量繁多，下列是從土壤中分離分解尿素細菌的有關問題，請分析回答：

(1)如圖是利用________法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步________到培養基的表面。除此方法外，常用的微生物接種方法還有________(寫一種)。

(2)如果要對培養的菌落進行純化，在培養基上劃線操作中，操作的第一步及每次劃線之前都要灼燒接種環，目的是對接種環進行________，灼燒的接種環冷卻后才能接種的原因是______________________。

(3)下面是兩種培養基的配方：

表1：A培養基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	瓊脂	H2O
1.4 g	2.1 g	0.2 g	10.0 g	1.0 g	15.0 g	1 000 mL

表2：B培養基配方

纖維素粉	Na2HPO4·	NaNO37H2O	KH2PO4	MgSO4·7H2O	KCl	酵母粉膏	H2O
5 g	1 g	1.2 g	0.9 g	0.5 g	0.5 g	0.5 g	1 000 mL

①配制培養基的操作步驟________(用字母順序回答)。

a．倒平板　b．計算　c．溶化　d．稱量　e．滅菌

②通常培養基采用____________法滅菌，在制備固體培養基的倒平板操作時，平板冷凝后，應將平板倒置，目的是________________________。

③如果要分離土壤中能分解尿素的細菌，應選擇上述________(A、B)配方的培養基，在該培養基中加入________指示劑，可初步鑒定出該種細菌能否分解尿素。

④據B培養基的成分，所培養微生物的同化作用類型是________。

(4)如果進一步從尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技術擴增，則每次循環復制可分為________________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它們能合成________，該物質被提取出后的純化方法通常是____________________________________________________。

(5)在微生物培養過程中，常需要對微生物進行計數，血球計數板是常用的工具，血球計數板的計數室長和寬各為1 mm，深度為0.1 mm，其中25×16型的血球計數板計數室以雙線等分成25個中方格，每個中方格又分成16個小方格。一般計數時選取的中方格位于計數室的____________________。下圖表示的是其中一個中方格的情況，對該中方格中的酵母菌進行計數的結果是________個。如果計數的幾個中方格中的細胞平均數為20個，則1 mL培養液中酵母菌的總數為________個。

(6)抗生素可由微生物產生，具有抑菌作用，能在瓊脂培養基中擴散。在篩選產生抗生素的菌種時，先在瓊脂培養基平板上劃線接種一種從土壤中獲得的甲菌，在27 ℃下培養3天，形成菌落。然后接種乙、丙、丁三種致病菌(圖A)，繼續在同樣條件下培養3天，結果如圖B。分析結果，得出的結論是(　　)

①甲菌產生了抗生素�、诙【�的生長被丙菌產生的抗生素抑制�、垡揖�的生長被甲菌產生的抗生素抑制　④丙菌產生的抗生素抑制了乙菌的生長

A．①③　　　　　　B．①④

C．②③　　　　　　D．②④

Answer 1

答案：(1)平板劃線'稀釋(分散、分離)'稀釋涂布平板法

(2)滅菌'防止高溫殺死需接種的微生物

(3)①bdcea�、诟邏赫羝麥缇�　防止培養皿內壁上出現的冷凝水污染培養基�、跘'酚紅'④異養型

(4)變性、復性、延伸'脲酶'凝膠色譜法

(5)四個角和中央的五個中方格　24　5×10⁶

(6)A

解析：(1)圖示利用平板劃線法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋到培養基的表面。除此方法外，常用的微生物接種方法還有稀釋涂布平板法。

(2)接種環通過灼燒滅菌，灼燒的接種環冷卻后才能接種的原因是防止高溫殺死需接種的微生物。

(3)①配制培養基的操作步驟：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。②通常培養基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，在制備固體培養基的倒平板操作時，平板冷凝后，應將平板倒置，目的是防止培養皿內壁上出現的冷凝水污染培養基。③如果要分離土壤中能分解尿素的細菌，應選擇上述以尿素為氮源的培養基，在該培養基中加入酚紅指示劑，可初步鑒定出該種細菌能否分解尿素。④B培養基的成分中，碳源為有機物，所培養微生物的同化作用類型是異養型。

(4)PCR技術擴增，則每次循環復制可分為變性、復性、延伸三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它們能合成脲酶，該物質被提取出后的純化方法通常是凝膠色譜法。

(6)乙、丙、丁三種致病菌不會產生抗生素，否則靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生長。從圖B來看，乙菌的生長被抑制，最可能的原因是甲菌產生了抗生素，此種抗生素只能抑制乙菌的生長，而對丙、丁兩種細菌沒有影響。①③選項正確，答案為A。