Question

【題目】科學家將外源目的基因與大腸桿菌的質粒進行重組，并在大腸桿菌中成功表達。下圖表示構建重組質粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請據圖回答：

（1）步驟①和②中常用的工具酶是 。

（2）經過①和②步驟后，有些質粒上的 基因內插入了外源目的基因，形成重組質粒。

（3）步驟③是 的過程。為了促進該過程，應該用 處理大腸桿菌。

（4）步驟④：將三角瓶內的大腸桿菌接種到含四環素的培養基C上培養，目的是篩選 。能在C中生長的大腸桿菌有 種。

（5）步驟⑤:用無菌牙簽挑取C上的單個菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環素）和E（含四環素）兩個培養基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示。含目的基因的菌落位于（選填“D”或“E”） 上，請在圖中相應的位置上圈出來。

Answer 1

【答案】（1）限制性內切酶、DNA連接酶

（2）氨芐青霉素抗性

（3）將重組質粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞） CaCl2溶液

（4）含四環素抗性基因的大腸桿菌 2種

（5）E

【解析】試題（1）將質粒切割開用限制酶，將目的基因與質粒連接起來用DNA連接酶．

（2）由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨芐青霉素抗性基因中．

（3）步驟③是基因工程第三步：將目的基因導入受體細胞．

（4）培養基C是選擇培養基，培養基中有四環素，專一篩選含四環素抗性基因的大腸桿菌，能在C中生長的大腸桿菌有兩種，分別是抗四環素和同時抗四環素和含氨芐青霉素的大腸桿菌．

（5）D培養基中大腸桿菌對四環素和含氨芐青霉素都抗，而E中只抗一種四環素，所以在E中對應區域（D中沒有菌落的部位），該處為轉基因大腸桿菌．