Question

【題目】為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行了如圖A所示的實驗。

（1）步驟③的培養基成分與普通液體培養基相比，最大的區別是步驟③培養基中_______。從功能上講，步驟③中使用的培養基屬于______________培養基。培養基的滅菌時間應該從____________________開始計時。

（2）同學甲進行步驟④的操作，其中．個平板經培養后的菌落分布如圖B所示。該同學的接種方法是__________________，出現圖B結果可能的失誤操作是_____________。

（3）同學乙采用平板劃線法純化菌株，培養后的菌落分布如圖C，平板中部分菌落越來越稀少，因為是__________________________。

（4）步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是_______________________________。

Answer 1

【答案】石油為唯一碳源 選擇 達到設定的溫度或壓力值 稀釋涂布平板法 涂布不均勻 劃線過程接種環上的菌種逐漸減少 篩選出分解石油能力最好的細菌

【解析】

從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。篩選菌株的過程要使用選擇培養基，操作過程中要注意無菌操作，常用的固體培養基上接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法；微生物計數可用稀釋涂布平板法和血球計數板計數法。

（1）為篩選出能分解石油的細菌，步驟③的培養基成分與普通液體培養基相比，最大的區別是步驟③培養基中所以石油是唯一碳源。從功能上講，步驟③中使用的培養基屬于選擇培養基。低溫常壓不能達到滅菌的目的，故培養基的滅菌時間應該從達到設定的溫度或壓力值開始計時。
（2）接種細菌常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖B中該同學的接種方法為稀釋涂布平板法，出現圖B的結果可能是操作過程中涂布不均勻導致的。

（3）根據圖示：同學乙采用的接種方法是平板劃線法純化菌株，培養后的菌落分布如圖C，平板中部分菌落越來越稀少，因為是劃線過程每次劃線的菌種都來自上次劃線的末端，隨劃線次數的增加接種環上的菌種逐漸減少，最后形成分散成單個菌，進而繁殖成菌落。

（4）步驟⑤后取樣測定石油含量，進一步操作是為篩選出分解石油能力最好的細菌。