Question

【題目】下列有關(guān)利用圖甲和圖乙信息來制備基因表達(dá)載體的說法正確的是（ ）

A.如圖甲將目的基因“切出”，可選擇Pst I，不能選擇Sma I

B.結(jié)合圖甲和圖乙可知在制備基因表達(dá)載體時(shí)可選擇用PstI和EcoRI兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒

C.如果質(zhì)粒上所選限制酶的酶切位點(diǎn)不止一個(gè)，則切割后的質(zhì)粒可能會(huì)丟失某些片段

D.若質(zhì)粒上標(biāo)出T-DNA片段，則所選限制酶切點(diǎn)應(yīng)位于T-DNA片段中

Answer 1

【答案】ACD

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA：分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原―抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、如圖甲將目的基因“切出”，可選擇PstⅠ，不能選擇SmaⅠ，因?yàn)橛孟拗泼窼maⅠ切割會(huì)破壞目的基因，A正確；
B、使用限制酶PstⅠ切割質(zhì)粒時(shí)會(huì)破壞標(biāo)記基因（抗生素抗性基因），使用限制酶EcoRⅠ切割質(zhì)粒時(shí)會(huì)破壞終止子，B錯(cuò)誤；
C、如果質(zhì)粒上所選限制酶的酶切位點(diǎn)不止一個(gè)，則切割后的質(zhì)粒可能會(huì)丟失某些片段，C正確；
D、農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。因此若質(zhì)粒上標(biāo)出T-DNA片段，則所選限制酶切點(diǎn)應(yīng)位于T-DNA片段中，D正確。
故選ACD。