Question

【題目】有些酵母菌可以利用工業廢甲醇作為碳源進行培養，這既可減少污染又可降低生產成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母并進行擴大培養，下圖所示為操作流程。請回答下列問題：

(1)在配制培養基過程中，對培養基應采用____滅菌。若需要調節培養基的pH，應在滅菌_______（填“前”或“后”）進行。

(2)在步驟③中將溫度大約為____（填“25℃”或“50℃”或“80℃”）的培養基倒入培養皿混勻，冷凝后倒置培養。為判斷實驗中的培養基是否起到了選擇作用，可用含甲醇和其他碳源的培養基作對照組重復步驟③，若對照組的菌落數目明顯____（填“大于”、“等于”、“小于”）實驗組，則說明起到了選擇作用。

(3)在操作④中劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，其他區域的劃線上卻均無菌落。操作失誤的原因可能是____。

(4)為重復利用篩選出的酵母，用海藻酸鈉和氯化鈣制成了包埋酵母的多孔狀凝膠珠。實驗表明：凝膠珠孔徑太大或太小，發酵效率都很低。請簡要分析其原因______________。

(5)酵母菌分解甲醇與某種蛋白質類酶密切相關，研究人員擬用凝膠色譜法從酵母菌蛋白質提取液中分離出該酶。在裝填凝膠時要盡量緊密，不得有氣泡存在。因為氣泡會______________，降低分離效果。

Answer 1

【答案】高壓蒸汽滅菌 前 50 大于 第一區域劃線結束，接種環灼燒后未冷卻（或劃線未從第一區域末端開始） 孔徑太大，酵母菌易漏出；孔徑太小，不利于反應物與酵母菌充分接觸 攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序

【解析】

常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法。

常用的接種方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。

分離蛋白質的方法：凝膠色譜法—根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。

（1）對培養基應該選擇高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，滅菌前應該先調節其pH，然后再滅菌。

（2）倒平板的適宜溫度是50度，冷凝后再倒置培養可以避免培養皿蓋上的水珠落入培養基造成污染。實驗組培養基中以甲醇作為唯一碳源，對照組可以用含甲醇和其他碳源的培養基作對照組重復步驟③，預期的結果是對照組不僅能利用甲醇的微生物可以生長，其他的也可以生長，故菌落數會多于實驗組。

（3）步驟④進行平板劃線法處理，該過程中為了避免雜菌污染，每次劃線前后都有灼燒接種環，為了避免高溫殺死菌種，需要等接種環冷卻后再劃線，若第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，其他區域的劃線上卻均無菌落，可能是第一區域劃線結束，接種環灼燒后未冷卻，高溫殺死了菌種。

（4）孔徑太大，酵母菌易漏出；孔徑太小，不利于反應物與酵母菌充分接觸，故凝膠珠孔徑太大或太小，發酵效率都很低。

（5）凝膠色譜法分離蛋白質時，若裝填凝膠時有氣泡存在，會影響蛋白質的洗脫次序，降低分離效果，故不能有氣泡存在。